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細(xì)胞培養(yǎng)一般方法有哪些
閱讀：704 發(fā)布時(shí)間：2022-11-9
細(xì)胞培養(yǎng)首先分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng).
一、原代培養(yǎng)需要從組織中消化、分離、純化出單細(xì)胞,然后繼續(xù)進(jìn)行傳代、凍存；
二、傳代培養(yǎng)首*行細(xì)胞復(fù)蘇:
1.應(yīng)遵守慢凍快融的原則.先將水溫鍋調(diào)至37-38度,取出凍存的細(xì)胞迅速放入后交細(xì)胞面浸至水面以下不斷搖動(dòng)至融化.
2.在無(wú)菌臺(tái)內(nèi)將培養(yǎng)基加入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),然后用無(wú)菌吸管從凍存管內(nèi)取出細(xì)胞,置培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)輕輕搖晃,使細(xì)胞均勻后置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),24h后換液；也可復(fù)蘇當(dāng)時(shí)離心（1000rpm 5min左右）后,培養(yǎng)基重懸培養(yǎng),適時(shí)換液.
細(xì)胞傳代:
1.貼壁細(xì)胞:對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱.PBS清洗2-3次,去除血清和死細(xì)胞,50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約0.6ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)配制強(qiáng)度經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2分鐘,鏡下見(jiàn)細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后收集離心（1000rpm 5min左右）,新鮮培養(yǎng)基重懸沉淀,加入培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn).
2.懸浮細(xì)胞:一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度或需更換新培養(yǎng)基,可先離心（1000rpm,5min左右）后加入培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng).