對(duì)于抗體結(jié)構(gòu)的質(zhì)量定量，完整的結(jié)構(gòu)解析包括整體結(jié)構(gòu)分析、亞基水平分析和肽圖。其中亞基水平分析在抗體藥物結(jié)構(gòu)分析中對(duì)設(shè)備要求低，分析時(shí)間短，且做為QC認(rèn)證的試驗(yàn)方法，有助于在研發(fā)前期理解抗體結(jié)構(gòu)。

Genovis抗體酶切產(chǎn)品可以在亞基水平幫助我們分析抗體片段的結(jié)構(gòu)，獲得均勻的Fab和Fc片段。而目前應(yīng)用較為廣泛的胰蛋白酶（Trypsin）、木瓜蛋白酶(papain)和胃蛋白酶（pepsin）切割位點(diǎn)并不專(zhuān)一，特異性差，酶切結(jié)果隨時(shí)間的變化容易造成抗體未被切開(kāi)或過(guò)度消化的結(jié)果。因此，Genovis可以幫助您更簡(jiǎn)單高效的完成抗體結(jié)構(gòu)分析。

1.    FabRICATOR

FabRICATOR (IdeS)廣泛用于表征、質(zhì)量控制、穩(wěn)定性測(cè)試、生產(chǎn)監(jiān)測(cè)和基于抗體的治療方法(如單克隆抗體、ADC、生物類(lèi)似藥和Fc -融合蛋白)的克隆選擇。該酶可在鉸鏈下方的單個(gè)氨基酸位點(diǎn)消化抗體，生成同質(zhì)F(ab')2和Fc片段。FabRICATOR可以用于消化人IgG1-4，猴、鼠、兔、羊的IgG。 

圖1  FabRICATOR酶切原理圖

 
圖2  FabRICATOR酶切確定抗體質(zhì)量屬性結(jié)果

除凍干酶外，該酶還可以提供多種產(chǎn)品形式可滿足不同的試驗(yàn)需求，幫助您更好的完成試驗(yàn)。

① FragIT™ 

FragIT旋轉(zhuǎn)柱含有與瓊脂糖珠共價(jià)偶聯(lián)的FabRICATOR (IdeS)酶，用于生成F(ab')2和Fc/2片段，而不會(huì)對(duì)最終的制備產(chǎn)生酶污染。

② FragIT™ Kit

適用于需要快速方便地消化抗體的應(yīng)用，或制備無(wú)殘留酶的Fc融合蛋白，F(xiàn)ragIT小柱裝填有固定在瓊脂糖珠上的FabRICATOR。使用FragIT試劑盒，均勻的F（ab'）2和Fc片段也可以使用CaptureSelect™親和純化柱進(jìn)行分離。 

圖3  FragIT™ Kit工作原理圖

③ FabRICATOR®-HPLC

FabRICATOR-HPLC是一種快速柱上消化單克隆抗體的高效液相色譜柱，它將FabRICATOR酶固定在與HPLC兼容的樹(shù)脂上，用于穩(wěn)定的，可重復(fù)性的柱上抗體消化。FabRICATOR-HPLC色譜柱可以用于標(biāo)準(zhǔn)的LC-MS常規(guī)分析；也可以是更*配置，例如2D-LC配置；*是將生物反應(yīng)器與MS連接為一個(gè)系統(tǒng)，該系統(tǒng)可以自動(dòng)化在線進(jìn)行柱上消化，抗體亞基分析，這將大大減少操作人員時(shí)間、樣品處理誤差，并增加樣品通量。

圖4 FabRICATOR®-HPLC工作原理圖

④ FabRICATOR® MagIC

FabRICATOR® MagIC 可以用于抗體的自動(dòng)化平臺(tái)，如Thermo Scientific™KingFisher™Duo Prime凈化系統(tǒng)，或者振動(dòng)臺(tái)。適用于手動(dòng)或自動(dòng)的基于IgG的生物制劑的常規(guī)分析。FabRICATOR MagIC 包含固定在磁性瓊脂糖珠上的FabRICATOR酶，支持并行樣品制備和多種抗體亞基的分析。

圖5  FabRICATOR® MagIC工作原理圖

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2.FabALACTICA®   

FabALACTICA (IgdE)促進(jìn)了雙特異性和多特異性抗體的表征和完整的Fc糖基化分析。它還簡(jiǎn)化了單價(jià)結(jié)合、高階結(jié)構(gòu)、二硫鍵和鉸鏈區(qū)突變抗體的研究。該酶在鉸鏈上方的特定位點(diǎn)消化人IgG1，產(chǎn)生完整和均勻的Fab和Fc片段。
 
圖6  FabALACTICA®酶切原理圖

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3.FabDELLO™   

FabDELLO對(duì)鉸鏈區(qū)突變的抗體(如LALA突變)具有活性，并使中級(jí)LC-MS分析能夠?qū)︺q鏈區(qū)突變抗體的關(guān)鍵質(zhì)量屬性進(jìn)行表征。能夠特異性地在鉸鏈上方的單個(gè)位點(diǎn)消化人IgG1，在不需要還原條件的情況下，在兩小時(shí)內(nèi)生成完整的Fab和Fc片段。

 
圖7 FabDELLO™酶切原理圖

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4.FabRICATOR®Z  鉸鏈下方  

FabRICATOR®Z (IdeZ)是一種半胱氨酸蛋白酶，可在鉸鏈下方的特定位點(diǎn)消化小鼠IgG2a和IgG3，在兩小時(shí)的孵化后產(chǎn)生生成F(ab')2和Fc片段。
 
圖8 FabRICATOR®Z酶切原理圖
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5.FabULOUS ™

FabULOUS (SpeB)可用于制備的Fab片段可用于親和性研究、Fab糖基化研究和結(jié)構(gòu)研究。
它可以在鉸鏈上方的特定位點(diǎn)消化人IgG和小鼠、大鼠、山羊、綿羊和兔子的IgG，產(chǎn)生均勻的Fab片段。

 
圖9 FabULOUS ™酶切原理圖

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5.GingisKHAN®   

GingisKHAN (Kgp)用于用LC-MS表征基于抗體的生物治療，研究Fc聚糖分析，雙特異性抗體，affinity和avidity效應(yīng)，并識(shí)別翻譯后修飾。在鉸鏈上方的特定位點(diǎn)消化人IgG1，產(chǎn)生完整和均勻的Fab和Fc片段。

 
圖10 GingisKHAN®酶切原理圖

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6.GlySERIAS™   

GlySERIAS是一種特別的酶，可消化富含甘氨酸的融合蛋白連接物，如Gly4Ser和Glyx Sery(GS)以及多甘氨酸(G)連接物。該酶能夠分離多功能融合蛋白的各個(gè)結(jié)構(gòu)域，以促進(jìn)特征分析。融合蛋白的亞基水平分析既能降低整個(gè)樣品的復(fù)雜性，又能使結(jié)構(gòu)域具體化。并允許特定領(lǐng)域的識(shí)別和翻譯后修飾的監(jiān)測(cè)。

 
圖11 GlySERIAS™酶切原理圖

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