細胞培養(yǎng)后，需要對其生長情況、形態(tài)甚至生物學性狀進行觀察。由于細胞小而復雜，若不借助適當?shù)氖侄?，難以觀察其形態(tài)、結構，更難發(fā)現(xiàn)細胞內各種組分的分子組成及功能。目前，已有多種研究細胞的技術，從光學顯微鏡到電子顯微鏡，從一般細胞化學法到免疫化學法。細胞染色是研究細胞生物學特征的一種常用手段，然而，對于細胞實驗新手來說，想要獲得一張漂亮的細胞染色圖并不容易。染色試劑不會選、細胞染色不均勻、染色時切片脫落等都是很常見的問題。今天小愛就為大家整理了幾種常用細胞染色方法及染色劑選擇指南，快來學習！

表1 幾種常用細胞染色方法及特點

了解細胞染色方法后，下面小愛向大家介紹研究不同細胞結構用到的熒光染料。

一、細胞膜常用染料

DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常見的細胞膜染料（見表2），它們是一族親脂性的熒光染料，用于細胞的形態(tài)學和結構研究。該系列染料進入細胞膜后，會在整個細胞膜上側向擴散，在最佳濃度時可以使整個細胞膜染色。其中DiD染料的染色效率高，染色均一，熒光不易猝滅，無明顯細胞毒性，且受自身熒光背景干擾小。目前DiD已成功應用于多種細胞的體內示蹤研究，如Treg細胞、間充質干細胞、腫瘤細胞、造血干祖細胞等。

表2 細胞膜常用染料及熒光顏色

二、其他細胞結構常用染料

生物染料在細胞結構和組分鑒定中有著廣泛的應用，除細胞膜研究外，我們經(jīng)常也會對一些其它細胞結構及成分進行探索，例如線粒體、溶酶體、蛋白質、細胞核等，而對于不同的細胞結構有不同的染料進行染色，小愛總結如下：

表3常用細胞染料及用途

三、細胞染色神器DAPI + Phalloidin

DAPI染色液(DAPI Staining Solution)常用于細胞核染色，可將細胞核染成藍色。鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）是細胞骨架的染色神器，羅丹明標記的Phalloidin（TRITC- Phalloidin）可將細胞染成橙紅色，DAPI與Phalloidin染色液是研究細胞形態(tài)變化時經(jīng)常用到的兩種共染的試劑，染色效果可見圖1[1]：A1-E1用TRITC-鬼筆環(huán)肽（橙紅）染色的細胞骨架免疫熒光圖；A2-E2用DAPI（藍色）染色的細胞核免疫熒光圖；A3-E3合并的L929細胞免疫熒光染色圖。圖2[2]是S100A16過表達或下調前后PDAC細胞形態(tài)的變化。

圖1 P34HB纖維支架敷料培養(yǎng)的L929的細胞毒性評估[1]。

圖2 試劑處理后PDAC細胞形態(tài)變化[2]。

注意事項：

1.熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡快檢測。2、避免反復凍融，否則容易失效。3、DAPI對人體有刺激性，注意適當防護。4、鬼筆環(huán)肽具有毒性，需小心操作（對人的半數(shù)致死劑量 LD50 約 2mg/kg）。

細胞染色專題---熒光染料選擇指南

參考文獻：

[1] Li J, Chen JN, Peng ZX, et al. Multifunctional Electrospinning Polyhydroxyalkanoate Fibrous Scaffolds with Antibacterial and Angiogenesis Effects for Accelerating Wound Healing[J]. Applied Materials & Interfaces. 2022.

[2] Li T, Ren TY, Huang CM, et al. YS100A16 induces epithelial-mesenchymal transition in human PDAC cells and is a new therapeutic target for pancreatic cancer treatment that synergizes with gemcitabine[J]. Biochemical Pharmacology 189 (2021) 114396.

常見問題解答（FAQ）

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