轉(zhuǎn)染試劑主要作用是輔助將質(zhì)粒、DNA、siRNA、miRNA或蛋白質(zhì)等外源物質(zhì)輸送到細(xì)胞內(nèi)部，目前已成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)試劑。令人擔(dān)憂的是，現(xiàn)在市面上的轉(zhuǎn)染試劑種類繁多，質(zhì)量參差不齊，那我們應(yīng)該如何選擇一款適用于自己實(shí)驗(yàn)的轉(zhuǎn)染試劑呢？

作為一名以前也常用轉(zhuǎn)染試劑做實(shí)驗(yàn)的老師姐，我認(rèn)為非常有必要拿出我很愛(ài)的一款轉(zhuǎn)染試劑推薦給大家。一款專門用于昆蟲細(xì)胞的轉(zhuǎn)染以及高滴度重組桿狀病毒的生產(chǎn)的轉(zhuǎn)染試劑。

昆蟲細(xì)胞表達(dá)是一種用于產(chǎn)生具有簡(jiǎn)單翻譯后修飾的蛋白質(zhì)的平臺(tái)。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和重組桿狀病毒的產(chǎn)生是昆蟲細(xì)胞表達(dá)的常用方法。TransIT®-Insect是一種無(wú)動(dòng)物來(lái)源的轉(zhuǎn)染試劑，專門針對(duì)各種昆蟲細(xì)胞類型的高基因表達(dá)進(jìn)行了優(yōu)化。

產(chǎn)品性能：

• 特殊的DNA遞送—在昆蟲細(xì)胞類型中，包括Sf9、High Five™ 和S2

圖1. 使用TransIT®-Insect高效轉(zhuǎn)染桿狀病毒基因組DNA。6孔板里進(jìn)行轉(zhuǎn)染，每孔5 x 105 Sf9細(xì)胞，質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染試劑比例1：3，使用0.5ug表達(dá)GFP的ProGreen™桿狀病毒表達(dá)載體（AB Vector）和0.1 µg的pVL1393 轉(zhuǎn)移載體(AB Vector). (A)轉(zhuǎn)染后6天使用Zeiss S100熒光顯微鏡拍攝熒光和相位對(duì)比圖像。(B) Merge。

圖2. TransIT®-Insect的性能優(yōu)于競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手的轉(zhuǎn)染試劑。昆蟲細(xì)胞系（A）Sf9，（B）High Five™, 和（C）果蠅S2細(xì)胞，在96孔板中用0.1µg由hr5增強(qiáng)子/IE1啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的熒光素酶表達(dá)質(zhì)粒進(jìn)行轉(zhuǎn)染，使用指ding試劑以zhi定試劑與DNA的比例（µl:µg）轉(zhuǎn)染。在轉(zhuǎn)染后48小時(shí)測(cè)量螢光素酶的表達(dá)。Sf9和High Five™在無(wú)血清培養(yǎng)基配方中培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染細(xì)胞；S2細(xì)胞在含有血清的培養(yǎng)基中。誤差條表示三次復(fù)孔平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差。

• 桿狀病毒產(chǎn)量高—昆蟲細(xì)胞中表達(dá)桿狀病毒的理想選擇

圖3. 使用TransIT®-Insect在High Five中的高效表達(dá)重組蛋白 。在6孔板中用2.5µg由hr5增強(qiáng)子/IE1啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的GFP表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)High Five™ 細(xì)胞（Thermo Fisher Scientific） 。從轉(zhuǎn)染后72小時(shí)的細(xì)胞制備總可溶性細(xì)胞裂解物。通過(guò)SDS-PAGE和考馬斯藍(lán)染色分析來(lái)自100µl培養(yǎng)物的裂解物；cells alone（未轉(zhuǎn)染）作為對(duì)照。

GFP-6XHis-S-HSV（*，~38kDa）在來(lái)自用TransIT®-Insect（Mirus Bio）轉(zhuǎn)染的細(xì)胞

用TransIT®-Insect 和DNA比例為2:1進(jìn)行轉(zhuǎn)染，觀察到高水平的表達(dá)。在轉(zhuǎn)染細(xì)胞的裂解物中清楚地檢測(cè)到含有6X His、S和HSV標(biāo)簽（~38kDa）的表達(dá)GFP（*）。

圖4. 使用TransIT®-Insect高效表達(dá)蛋白。昆蟲細(xì)胞系(A) Sf9，(B) High Five™和(C)果蠅S2在96孔板中轉(zhuǎn)染 0.1 ug的熒光素酶表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒的比例為2:1。在轉(zhuǎn)染后24、48和72小時(shí)三個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)熒光素酶的表達(dá)。Sf9和High Five™細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染；S2細(xì)胞置于含血清的培養(yǎng)基中。

• 血清兼容—無(wú)動(dòng)物來(lái)源的非脂質(zhì)體配方，

• 性價(jià)比高—每次轉(zhuǎn)染所需的試劑量較低

部分應(yīng)用文獻(xiàn)展示：

#1：Establishment of a Pseudovirus Platform for Neuraminidase Inhibiting Antibody Analysis.International Journal of Molecular Sciences (2023) 24:2376

Cell line：sf21

#2：MicroRNA miR-274-5p Controls Melanotic Mass Formation and Developmental Growth by Regulating the Found-in-Neurons-JNK Signaling Axis in Drosophila.Preprints (2023).

Cell Type: S2

#3：Baculovirus actin-based motility drives nuclear envelope disruption and nuclear egress.Current Biology (2018).

Cell line : High Five

#4：miR-34-5p, encoded by Spodoptera frugiperda, participates in anti-baculovirus by regulating innate immunity in the insect host.International Journal of Biological Macromolecules (2022) 222:2190

Cell Type: S9

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