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MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式鑒定配色方案
閱讀：10772發(fā)布時(shí)間：2017-11-17
MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式鑒定操作步驟
流程
準(zhǔn)備細(xì)胞——抗體染色——上機(jī)檢測(cè)
1、準(zhǔn)備細(xì)胞：取培養(yǎng)的細(xì)胞離心（300 g/5min），棄去上清, 加入一定量PBS洗滌一次，棄去上清，彈散細(xì)胞，細(xì)胞重懸到5×106~10×106之間。
2、MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式鑒定配色方案：
取100 ml的細(xì)胞于EP管或流式管內(nèi)，分三管染色。
*管 陽(yáng)性配色 Anti-human CD90 FITC, Anti human CD105 APC，Anti-human CD45 PE-Cy7各加5 ml。
第二管 陰性配色 Anti-human HLA-RA FITC, Anti-human CD34 PE-Cy7, Anti-human CD73 APC各加5 ml。
第三管同型對(duì)照 Mouse IgG1 K Isotype Control FITC 0.6 ml，Mouse IgG1 Isotype Control PE-Cy7 1.2 ml，Mouse IgG1 Isotype Control APC 1.2 ml。
配色依據(jù)：細(xì)胞治療協(xié)會(huì)間充質(zhì)和組織干細(xì)胞委員會(huì)2006年提出了MSC鑒定的zui低標(biāo)準(zhǔn)，關(guān)于細(xì)胞表型的要求是表達(dá)CD90， CD105和CD73不表達(dá)CD45, CD34, CD14或CD11b, CD79a或CD19和HLA-DR；陽(yáng)性指標(biāo)都需要染色，陰性指標(biāo)一般選擇2-3個(gè)指標(biāo)，因?yàn)槭亲黾?xì)胞表型鑒定，所以要配齊同型對(duì)照。
3、加入相應(yīng)的抗體后混勻，建議彈管子，盡量不用槍頭直接吹打，室溫避光孵育15 min，染色過(guò)程中再混勻一次。
4、染色完成后加入1 ml的PBS洗滌細(xì)胞，離心300 g/5min。
5、棄去上清，彈散細(xì)胞，加入500 ml PBS重懸，上機(jī)檢測(cè)。
注意：1、同型對(duì)照是根據(jù)染色抗體的用量來(lái)計(jì)算的，所以每種同型對(duì)照可能加入量可能不一樣（具體可看后文同型對(duì)照章節(jié)的介紹）。
2、先上機(jī)檢測(cè)同型對(duì)照管，各檢測(cè)通道以這一管的信號(hào)設(shè)為陰性，在上機(jī)檢測(cè)抗體染色管。
3、zui后結(jié)果的顯示用峰圖來(lái)表示，每種抗體的檢測(cè)結(jié)果都與對(duì)應(yīng)的同型對(duì)照染色結(jié)果疊加展示（ overlay ）。
MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式鑒定結(jié)果
注意：CD90表達(dá)量非常高，所以建議用FITC熒光染料，F(xiàn)ITC/PE-Cy7/APC這三種熒光染料之間幾乎沒有補(bǔ)償，所以這三種染料一起染色不需調(diào)節(jié)補(bǔ)償，如果是做臍帶干細(xì)胞的鑒定，CD105抗體選擇SN6克隆號(hào)，其他克隆號(hào)染色結(jié)果不好（某些克隆號(hào)染不上）。
MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式配色抗體
品牌 | 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
BioGems | 03011-50 | Anti-Human CD90 (Thy-1) FITC | 25 test/100 tests | 25 test 1540元 |
BioGems | 07111-77 | Anti-Human CD45 PE-Cy7 | 25 test/100 tests | 25 test 1680元 |
BioGems | 17111-80 | Anti-Human CD105 (Endoglin) APC | 25 test/100 tests | 25 test 2170元 |
BioGems | 74111-50 | Anti-Human HLA-DR FITC | 25 test/100 tests | 25 test 1400元 |
BioGems | 06411-77 | Anti-Human CD34 PE-Cy7 | 25 test/100 tests | 25 test 2170元 |
BioGems | 05811-80 | Anti-Human CD73 APC | 25 test/100 tests | 25 test 1960元 |
|
| 同型對(duì)照 | 總價(jià) | 10920元 |
BioGems | 44212-50 | Mouse IgG1 K Isotype Control FITC | 100 mg | 1120元 |
BioGems | 44212-77 | Mouse IgG1 Isotype Control PE-Cy7 | 100 mg | 1890元 |
BioGems | 44212-80 | Mouse IgG1 Isotype Control APC | 100 mg | 1750元 |
MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式鑒定配色方案由Biogems提供。Biogems是PeproTech的流式抗體品牌，質(zhì)高價(jià)惠，現(xiàn)正進(jìn)行一系列*活動(dòng)。
MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式配色抗體產(chǎn)品由重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司授權(quán)代理，。重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司以“專注干細(xì)胞研究，提升干細(xì)胞品質(zhì)”為發(fā)展理念，專業(yè)從事干細(xì)胞基礎(chǔ)研究、干細(xì)胞再生醫(yī)學(xué)臨床應(yīng)用研究及干細(xì)胞技術(shù)服務(wù)。
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