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血清在細(xì)胞培養(yǎng)中常見問題
閱讀：2424發(fā)布時(shí)間：2021-1-8
對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)而言，胎牛血清（Fetal Bovine Serum，F(xiàn)BS）的重要性不言而喻。盡管近年來無血清培養(yǎng)基越來越受到關(guān)注，但目前大部分細(xì)胞還無法適用這些培養(yǎng)基，并且存在費(fèi)用較高和細(xì)胞生長較緩慢的缺點(diǎn)，因此，含有FBS的*培養(yǎng)基仍然是目前主流的細(xì)胞培養(yǎng)體系。血清是一種*培養(yǎng)基，含有細(xì)胞生長繁殖所需的多種營養(yǎng)成分，如蛋白質(zhì)、多肽等，多用于細(xì)胞培養(yǎng)、生物制品及診斷試劑的生產(chǎn)。
市場上的胎牛血清種類繁多，魚龍混雜，使人難以分辨真?zhèn)渭捌焚|(zhì)。好不容易在眾多*中挑選出誠心如意的產(chǎn)品后，那我們就可以安心使用了嘛？
不不不，下面小編給大家匯總小伙伴經(jīng)常咨詢的一些問題。
? 正常情況下，融化后血清的外觀顏色應(yīng)該是？
血清為動(dòng)物來源，成分復(fù)雜，不同批次間會(huì)存在一些外觀上的差別。一般情況下，它們的顏色可能是金黃色、紅色、琥珀棕色或者是介于三者之間。
? 血清應(yīng)如何保存？
未拆封的血清應(yīng)存放于-15至-20℃，避免反復(fù)凍融。拆封后的血清應(yīng)無菌分裝成一次的用量并存放于-15至-20℃，在產(chǎn)品質(zhì)量證書標(biāo)識(shí)的效期內(nèi)均可使用。2-8℃溶解后建議盡快使用。
? 血清的有效期是多久？
大部分康寧血清效期是5年，針對(duì)每個(gè)批次，請通過質(zhì)檢文件確定具體效期日期。
? 血清應(yīng)如何融解？
從冰箱中取出血清，放于2-8℃融化，融化過程中不時(shí)旋轉(zhuǎn)（swirling mix）混勻。充分融解后分裝或平衡到室溫后使用
? 為什么有時(shí)血清中出現(xiàn)絮狀沉淀？是否需要去除？如何去除？
多種原因可能導(dǎo)致絮狀沉淀的形成，原因之一是融化過程中，脂蛋白聚集所致。該現(xiàn)象一般不會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量。可以400g離心5分鐘，取上清，然后過濾。根據(jù)需要選擇合適的濾膜孔徑，一般的是0.22um PES材質(zhì)的濾膜。為避免濾膜阻塞，建議離心后取上清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾而不是直接過濾血清。
? 為什么存放于冰箱中的血清會(huì)出現(xiàn)沉淀？如何避免該現(xiàn)象？
在2-8°C條件下存放，血清中的多種蛋白或脂蛋白會(huì)形成肉眼可見的沉淀，如血纖蛋白（fibrin），單體時(shí)處于溶解狀態(tài)，在凍融過程中會(huì)發(fā)生聚集，形成肉眼可見的沉淀。但該現(xiàn)象一般不會(huì)影響血清的性能?？梢?00g離心5分鐘，取上清，然后過濾。根據(jù)需要選擇合適的濾膜孔徑，一般的是0.22um PES材質(zhì)的濾膜。為避免濾膜阻塞，建議離心后取上清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾而不是直接過濾血清。為盡量避免出現(xiàn)上述現(xiàn)象，建議血清分裝成一次性用量存于-15°至-20℃冰箱，避免反復(fù)凍融和融化后的血清在2-8°C條件下長時(shí)間放置。
? 血清是否需要做滅活處理？
這取決于您的應(yīng)用。
滅活過程中，會(huì)導(dǎo)致血清中某些成分被破壞，如氨基酸，維生素，生長因子等。所以只有在您的實(shí)驗(yàn)對(duì)血清有特殊要求時(shí)，才會(huì)考慮對(duì)血清進(jìn)行滅活處理。如您的實(shí)驗(yàn)對(duì)血清中的某種組分敏感，需要去除該組分。見的情況是需要去除血清中的補(bǔ)體蛋白，因?yàn)檠a(bǔ)體在機(jī)體中參與細(xì)胞殺傷，巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞活化，肥大細(xì)胞和血小板組胺釋放，平滑肌收縮等過程，所以一般在免疫學(xué)相關(guān)研究中及肌細(xì)胞和干細(xì)胞的培養(yǎng)過程中需要對(duì)血清進(jìn)行滅活處理。
? 如何進(jìn)行血清滅活處理？
血清請先按上述“血清應(yīng)如何融解”中的操作步驟融化和混勻，熱滅活時(shí)請將血清置于56℃水浴30分鐘。為盡量減少熱滅活對(duì)血清品質(zhì)的影響，一次滅活的血清體積不宜過大。準(zhǔn)備同樣的容器裝相等體積的水（與血清相同溫度），滅活時(shí)將裝有血清和水的容器同時(shí)放入56℃水浴, 在裝水的容器中放置溫度計(jì)，加熱過程中不時(shí)輕輕旋轉(zhuǎn)混勻血清，當(dāng)溫度計(jì)顯示達(dá)到56℃左右，開始計(jì)時(shí)。56 ℃水浴后，建議馬上轉(zhuǎn)移到冰上降溫。
? 為什么需要對(duì)血清進(jìn)行g(shù)amma射線輻照？
gamma 射線輻照的目的是滅活血清中的病毒，一般情況下，25-40kGy和30-45kGy是常用的輻射劑量。
? 什么情況下需要無Ca2+/Mg2+離子的PBS？
取決于您的研究應(yīng)用。除了一些Ca2+/Mg2+會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的實(shí)驗(yàn)以外，一般在胰酶消化前，建議用無Ca2+/Mg2+離子的PBS清洗細(xì)胞，因?yàn)镃a2+/Mg2+會(huì)抑制胰酶活性。若消化后的貼壁細(xì)胞需要繼續(xù)培養(yǎng)，建議消化后用含Ca2+/Mg 2+的PBS清洗，因?yàn)镃a2+/Mg2+有助于細(xì)胞的貼壁過程。另外，若需要在緩沖液中長時(shí)間保存細(xì)胞，也推薦使用含Ca2+/Mg2+的PBS。
? 康寧無Ca2+/Mg2+離子的PBS和DPBS的區(qū)別是什么？
取決于您的研究應(yīng)用。除了一些Ca2+/Mg2+會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的實(shí)驗(yàn)以外，一般在胰酶消化前，建議用無Ca2+/Mg2+離子的PBS清洗細(xì)胞，因?yàn)镃a2+/Mg2+會(huì)抑制胰酶活性。若消化后的貼壁細(xì)胞需要繼續(xù)培養(yǎng)，建議消化后用含Ca2+/Mg2+的PBS清洗，因?yàn)镃a2+/Mg2+有助于細(xì)胞的貼壁過程。另外，若需要在緩沖液中長時(shí)間保存細(xì)胞，也推薦使用含Ca2+/Mg2+的PBS。
? 康寧是否有注射級(jí)別（WFI）的水？
康寧細(xì)胞培養(yǎng)用水按照USP和/或EP 中對(duì)注射用水（WFI）的無菌要求進(jìn)行質(zhì)控，但康寧的該類產(chǎn)品為科研用產(chǎn)品，非臨床注射用水。
? 用于消化的胰酶中加EDTA的原因是什么？
鈣離子會(huì)抑制胰酶活性，EDTA作為鈣離子螯合劑，可以去除鈣離子，有助于胰酶更好發(fā)揮消化細(xì)胞的功能
? 為什么在使用胰酶前要先清洗貼壁細(xì)胞？
目前大部分情況下，細(xì)胞培養(yǎng)液中都含有一定量血清。血清中含有抑制胰酶活性的成分，如α1-antitrypsin 和α2-macroglobulin。建議使用無鈣鎂離子的緩沖液清洗細(xì)胞。
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Gibco | 10099141C | 澳洲特級(jí)胎牛血清 |
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Gibco | 10270-106 | 南美源胎牛血清 |
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Hyclone | SH30084.03 | 澳洲優(yōu)等胎牛血清 |
Hyclone | sv30087.02 | 南美胎牛血清 |
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ABW | AB-NCS-0500 | 新生牛血清 |
ABW | AB-NCS-HI-0500 | 熱滅活新生牛血清 |
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