 | 重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司 |
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Lonza LT07-710 支原體檢測(cè)試劑盒使用指南
閱讀：3058發(fā)布時(shí)間：2021-1-8
產(chǎn)品名稱(chēng)：MycoAlert™ PLUS 支原體檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)： LT07-710
MycoAlert™ PLUS支原體檢測(cè)試劑盒 產(chǎn)品介紹：
MycoAlert™ PLUS Assay是一種精選生物化學(xué)檢測(cè)方法，用于檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的支原體污染問(wèn)題。支原體是一種能夠自我復(fù)制的小的原核微生物，和其他細(xì)菌不同的是它們沒(méi)有細(xì)胞壁，所以細(xì)胞形態(tài)不固定，可以有多種變化，可以在培養(yǎng)基上形成極小的菌落。支原體是寄生生物，但同時(shí)也具有腐生功能。細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的污染支原體會(huì)使細(xì)胞生長(zhǎng)變慢，影響細(xì)胞活性變化。新一代MycoAlert™ PLUS Assay可以檢測(cè)出所有6種支原體屬，多達(dá)180種支原體。與MycoAlert™支原體檢測(cè)試劑盒相比有更高的靈敏度和準(zhǔn)確性。操作簡(jiǎn)單快速，只需兩步移液操作，20分鐘內(nèi)就可得出結(jié)果。適合用于檢測(cè)的樣品包括細(xì)胞上清液、未啟用培養(yǎng)基、10%-20% FCS或FBS、L-谷氨酰胺、青霉素-鏈霉素混合物、中性胰蛋白酶、慶大霉素/兩性霉素B等。
檢測(cè)原理
檢測(cè)樣品中的活性支原體裂解后，釋放出的酶與MycoAlert™ PLUS Substrate反應(yīng)，催化ADP轉(zhuǎn)化為ATP。加入MycoAlert™ PLUS Reagent試劑后在熒光素酶作用下ATP產(chǎn)生光信號(hào)(ATP+ Luciferin + O2 →Oxyluciferin + AMP + PPi + CO2 + LIGHT)。光信號(hào)可用光度計(jì)讀出，根據(jù)第二次讀數(shù)(Read B)與次讀數(shù)(Read A)比率可是確定是否存在支原體污染。Read B/Read A比率<1, 支原體陰性，無(wú)支原體；1-1.2，不確定是否存在支原體，需重新檢測(cè)；>1.2，支原體陽(yáng)性，存在支原體污染。
產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)：
» 生物發(fā)光技術(shù)，無(wú)需DNA提取物
» 樣品檢測(cè)只需兩步移液操作，結(jié)果分析簡(jiǎn)單
» 可以和低靈敏性的板光度計(jì)或多功能讀數(shù)器配用
» 可用于檢測(cè)未啟用培養(yǎng)基，培養(yǎng)基補(bǔ)充物或水溶液
» 快速方便，標(biāo)準(zhǔn)程序20分鐘就可出結(jié)果
» 通用性強(qiáng)，可檢測(cè)所有常見(jiàn)的支原體污染(不含脲原體屬)
組成成份：
• MycoAlert™ PLUS 試劑（凍干） 1 x 10 ml (LT27-286)
• MycoAlert™ PLUS 底物（凍干） 1 x 10 ml (LT27-289)
• MycoAlert™ PLUS 檢測(cè)緩沖液 1 x 20 ml (LT27-292)
支原體檢測(cè)試劑盒(MycoAlert Mycoplasma Detection Kit) 定義：支原體（mycoplasma），又稱(chēng)霉形體，沒(méi)有細(xì)胞壁的原核生物，為目前發(fā)現(xiàn)的小的原核生物。支原體細(xì)胞中*可見(jiàn)的細(xì)胞器是核糖體（支原體是原核細(xì)胞，原核細(xì)胞的細(xì)胞器只有核糖體）。它對(duì)許多抗生素具有抗性，如類(lèi)胸膜肺炎微生物。
一.支原體污染成為細(xì)胞培養(yǎng)的重大隱患:
1．研究表明，世界范圍內(nèi)超過(guò)15%的培養(yǎng)細(xì)胞都有支原體污染。
2．支原體污染會(huì)對(duì)細(xì)胞造成多方面的影響，包括代謝、免疫或生化特性、生長(zhǎng)狀況、以及細(xì)胞存活等多方面的改變。
3．支原體污染會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性、可靠性和準(zhǔn)確性。
4．支原體難以檢測(cè)，同時(shí)也很難消除。支原體能輕易地通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)濾膜，同時(shí)也能拮抗絕大多數(shù)的抗生素，給細(xì)胞培養(yǎng)造成巨大損失。
二.常規(guī)檢測(cè)才能有效避免細(xì)胞支原體污染:
1．常規(guī)性的進(jìn)行支原體檢測(cè)是保證細(xì)胞培養(yǎng)中不受到支原體污染影響的*途徑。
2．傳統(tǒng)的支原體檢測(cè)方法需要在特殊的選擇性培養(yǎng)基作用下對(duì)樣品進(jìn)行培養(yǎng)，時(shí)間往往達(dá)數(shù)周，費(fèi)時(shí)，費(fèi)力并且無(wú)法獲得足夠的靈敏度和特異性。
三、檢測(cè)原理
美國(guó)Lonza MycoAlert Mycoplasma Detection Kit支原體檢測(cè)試劑盒是利用支原體酶的這一特定活性，進(jìn)行選擇性的生物化學(xué)檢測(cè)。這些酶的存在提供了一種快速的篩選操作，能靈敏地檢測(cè)出樣本中的支原體污染。這些存活的支原體被溶解，然后釋放出來(lái)的酶與支原體檢測(cè)試劑盒中提供的底物發(fā)生催化反應(yīng)，將ADP轉(zhuǎn)化成ATP。通過(guò)測(cè)量樣品中添加底物前后ATP的含量，可以得到一個(gè)比率，該比率指示支原體是否存在。如果這些酶不存在，第二次讀數(shù)相對(duì)于讀數(shù)就沒(méi)有增加；如果酶與底物進(jìn)行特異性反應(yīng)，就會(huì)導(dǎo)致ATP含量上升。ATP含量的上升通過(guò)生物發(fā)光化學(xué)反應(yīng)可以檢測(cè)到，其公式如下：Luciferase ATP + Luciferin + O2 ——————> Oxyluciferin + AMP Mg 2+ + PPi + CO2 + LIGHT這個(gè)反應(yīng)的發(fā)生是在室溫(18°C～22°C)進(jìn)行的，也是熒光素酶反應(yīng)的*溫度。在支原體檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)原理中，*通過(guò)分光光度計(jì)讀數(shù)，由于發(fā)出光的強(qiáng)度與ATP的濃度成線性關(guān)系，因此可檢測(cè)支原體的污染問(wèn)題。
Lonza支原體檢測(cè)試劑盒的產(chǎn)品特征Lonza MycoAlert Mycoplasma Detection Kit支原體檢測(cè)試劑盒是專(zhuān)門(mén)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中是否被支原體污染的經(jīng)典試劑盒，它包含檢測(cè)所用到的各種試劑和產(chǎn)品操作手冊(cè)。該支原體檢測(cè)試劑盒具有操作簡(jiǎn)單、快速高效、結(jié)果穩(wěn)定可靠、靈敏度*等優(yōu)點(diǎn)，讓您在支原體檢測(cè)時(shí)輕松容易，并確保您的培養(yǎng)潔凈無(wú)污染。
四.推薦Lonza（原Cambrex）公司 MycoAlert 支原體檢測(cè)試劑盒:采用發(fā)光檢測(cè)，更能快速反映細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染。避免支原體造成的損害，省力。
1．快速--20分鐘就可以得到結(jié)果。
2．敏感度--可檢測(cè)極少量的支原體。
3．簡(jiǎn)易--僅混合2種試劑和您的樣品，將2種讀數(shù)放到照度計(jì)上就可以得到確切結(jié)果。
4．完整--試劑盒包括檢測(cè)用所需要的全部試劑！
訂購(gòu)信息：
貨號(hào) 描述
• LT07-701 MycoAlert™ PLUS Mycoplasma Detection Kit, 10Tests
• LT07-703 MycoAlert™ PLUS Mycoplasma Detection Kit, 30Tests
• LT07-705 MycoAlert™ PLUS Mycoplasma Detection Kit, 50Tests
• LT07-710 MycoAlert™ PLUS Mycoplasma Detection Kit, 100Tests
• LT07-518 MycoAlert™ Assay Control Sets, 10Tests
• LT27-292 MycoAlert™ Assay Buffer, 20ml
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