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ProteanFect：小鼠原代T細胞從提取到轉(zhuǎn)染全流程攻略
閱讀：224發(fā)布時間：2025-1-15
小鼠原代T細胞一般從脾臟組織中得到，包括脾臟研磨、細胞分離、純化T細胞等步驟。以下是常用的小鼠原代T細胞提取流程：
實驗前準備
- 材料與試劑：新鮮小鼠脾臟、PBS緩沖液、無菌手術(shù)器械（剪刀、鑷子等）、細胞過濾器、CD4/CD8磁珠分選試劑（如需純化特定亞型），或陰選的方式去除B細胞、單核細胞、NK細胞的磁珠分選試劑，RPMI-1640培養(yǎng)基，人白介素2，胎牛血清，抗生素（如青霉素-鏈霉素）。
- 設(shè)備：無菌操作臺、離心機、磁力分選架。
從小鼠脾臟獲取單細胞懸液
- 小鼠頸椎脫臼處死，75%乙醇浸泡5分鐘，取出小鼠置于無菌操作臺上，左腹側(cè)朝上。
- 在小鼠左腹側(cè)中部剪開小口，撕開皮膚暴露腹壁，可見紅色長條狀脾臟。
- 在脾臟下側(cè)提起腹膜，剪開后上翻，暴露脾臟，用鑷子提起脾臟，眼科剪分離下面的結(jié)締組織，取出脾臟，剝?nèi)ブ車慕Y(jié)締組織，期間用含有2%FBS的PBS溶液保持脾臟濕潤。
- 將脾臟放于70UM過濾網(wǎng)中，用注射器針芯輕輕研壓脾臟，用含2%FBS的PBS沖洗過濾網(wǎng)，獲細胞懸液。
- 300G離心5分鐘，收集細胞沉淀，然后加入紅細胞裂解液裂解，將紅細胞充分裂解，收集白細胞。
從單細胞懸液中分離小鼠原代T細胞
- 全T細胞分離：利用陰選的方式去除B細胞、單核細胞、NK細胞等，按照分選試劑盒的說明書進行。
- 亞群分離（如需要CD4+或CD8+ T細胞）：
- 使用CD4或CD8磁珠（如MACS磁珠）分選獲得特定T細胞亞群。
- 將磁珠標記的細胞懸液置于磁性分選裝置中，分離出目標T細胞亞群。
培養(yǎng)與檢測
- 將分離的T細胞重懸于含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，并加入抗生素與人白介素2。
- 細胞密度一般控制在1-2×10^6 CELLS/ML，放入37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
轉(zhuǎn)染
西湖凝聚體推出針對小鼠原代T的PT03 PROTEANFECT MAX小鼠原代T細胞轉(zhuǎn)染試劑盒。使用ProteanFect Max遞送EGFP mRNA至小鼠原代T細胞，實現(xiàn)高效表達。
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