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細胞毒實驗(MTT法)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)

時間:2015-5-21閱讀:271

關(guān)鍵詞:細胞毒實驗(MTT法)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介:世界*品牌細胞毒實驗(MTT法)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
細胞毒實驗(MTT法)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結(jié)果。
產(chǎn)品品牌:細胞毒實驗(MTT法)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>(Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit) 以MTT為指示劑,在經(jīng)典操作方法的基礎(chǔ)上,采用了*的甲簪溶解液,可以直接溶解甲簪,而無需離心去除原有的培養(yǎng)液,故可避免因甲簪部分被吸除而引起的操作誤差,具有本底低,靈敏度高,線性范圍寬,操作簡便等特點。  
保存條件 
    MTT溶液-20℃保存,一年有效;Formazan溶解液室溫或-20℃保存。 
使用說明 
    1. 細胞的增殖和細胞毒實驗,一般可在96孔細胞培養(yǎng)板中進行。 
    2. 每孔加入100微升細胞懸液。細胞的數(shù)量取決于實驗目的和培養(yǎng)時間。增殖實驗每孔通常加入103個以上數(shù)量的細胞;細胞毒性實驗每孔至少加入5x103個或以上數(shù)量的細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等因素確定)。 
    3. 接種的細胞按照實驗需要,送入細胞培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。增殖實驗通常要給予0-10微升特定的藥物或生長因子進行刺激。細胞毒實驗通常要給予0-10微升抑制因子或細胞藥物; 
    4.培養(yǎng)結(jié)束后,每孔加入20微升MTT溶液,在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育3-6小時;   
    5.孵育結(jié)束后,每孔加入100微升Formanzan溶解液,在37℃細胞培養(yǎng)箱內(nèi)再繼續(xù)孵育,直至在鏡下觀察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小時左右,紫色結(jié)晶會全部溶解。如果紫色結(jié)晶較小較少,溶解的時間會短一些。如果紫色結(jié)晶較大較多,溶解的時間會略長。  
    6. 在570nm測定吸光度。如無570nm濾光片, 560-600nm范圍的濾光片均可使用。
步驟
1、接種細胞 :用含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液,以每孔1000-10000個細胞接種到96孔板,每孔體積200ul。
2、培養(yǎng)細胞 :同一般培養(yǎng)條件,培養(yǎng)3-5天(可根據(jù)試驗目的和要求決定培養(yǎng)時間)。
3、呈色 :培養(yǎng)3-5天后,每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS 配)20ul.繼續(xù)孵育4小時,終止培養(yǎng),小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液,對于懸浮細胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO,振蕩10分鐘,使結(jié)晶物充分融解。
4、比色 :選擇490nm波長,在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值,記錄結(jié)果,以時間為橫坐標,吸光值為縱坐標繪制細胞生長曲線。

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