熒光顯微鏡是以紫外線為光源， 用以照射被檢物體， 使之發(fā)出熒光， 然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細胞內物質的吸收、運輸、化學物質的分布及定位等。 細胞中有些物質，如葉綠素等，受紫外線照射后可發(fā)熒光；另有一些物質本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光，熒光顯微鏡就是對這類物質進行定性和定量研究的工具之一。
熒光顯微鏡的使用方法：
1、打開燈源，超高壓汞燈要預熱15min才能達到zui亮點；
2、透射式熒光顯微鏡需在光源與暗視野聚光器之間裝上所要求的激發(fā)濾片，在物鏡的后面裝上相應的壓制濾片。落射式熒光顯微鏡需在光路的插槽中插入所要求的激發(fā)濾片、雙色束分離器、壓制濾片的插塊；
3、用低倍鏡觀察，根據(jù)不同型號熒光顯微鏡的調節(jié)裝置，調整光源中心，使其位于整個照明光斑的*；
4、放置標本片，調焦后即可觀察。使用中應注意：未裝濾光片不要用眼直接觀察，以免引起眼的損傷；用油鏡觀察標本時，必須用無熒光的特殊鏡油；高壓汞燈關閉后不能立即重新打開，需待汞燈*冷卻后才能再啟動，否則會不穩(wěn)定，影響汞燈壽命；
5、觀察。例如：在熒光顯微鏡下用藍紫光濾光片，觀察到經(jīng)0.01%吖啶橙熒光染料染色的細胞，細胞核和細胞質被激發(fā)產(chǎn)生兩種不同顏色的熒光(暗綠色和橙紅色)。
熒光顯微鏡的注意事項：
1、嚴格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進行操作，不要隨意改變程序；
2、應在暗室中進行檢查。進入暗室后，接上電源，點燃超高壓汞燈5～15min，待光源發(fā)出強光穩(wěn)定后，眼睛*適應暗室，再開始觀察標本；
3、防止紫外線對眼睛的損害，在調整光源時應戴上防護眼鏡；
4、檢查時間每次以1～2h為宜，超過90min，超高壓汞燈發(fā)光強度逐漸下降，熒光減弱；標本受紫外線照射3～5min后，熒光也明顯減弱；所以，zui多不得超過2～3h；
5、熒光顯微鏡光源壽命有限，標本應集中檢查，以節(jié)省時間，保護光源。天熱時，應加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應從開始就記錄使用時間。燈熄滅后欲再用時，須待燈泡充分冷卻后才能點燃。一天中應避免數(shù)次點燃光源；
6、標本染色后立即觀察，因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時間，防止封裱劑蒸發(fā)。長時間的激發(fā)光照射標本，會使得熒光衰減和消失現(xiàn)象，故應盡可能縮短照射時間。暫時不觀察時可用擋光板遮蓋激發(fā)光；
7、標本觀察時候應采用無熒光油，應避免眼睛直視紫外光源；
8、電源應安裝穩(wěn)壓器，電壓不穩(wěn)會降低熒光燈的壽命。
