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奧林巴斯CKX53細(xì)胞熒光觀察顯微鏡

以下是使用奧林巴斯 CKX53 進(jìn)行細(xì)胞熒光觀察的具體內(nèi)容：

奧林巴斯CKX53準(zhǔn)備工作

儀器檢查：取下顯微鏡的防塵罩，檢查顯微鏡各部件是否正常，如光源能否正常發(fā)光、熒光濾光片是否在位且無(wú)損壞等。

樣品準(zhǔn)備：將帶有熒光標(biāo)記的細(xì)胞樣本制備好，如細(xì)胞爬片經(jīng)固定、通透、封閉等處理后，與相應(yīng)的熒光抗體或熒光染料進(jìn)行孵育，然后用緩沖液沖洗，最后可將其放置在載玻片上，用封片劑封片。若是細(xì)胞培養(yǎng)皿中的細(xì)胞，確保細(xì)胞狀態(tài)良好且分布均勻。

選擇熒光通道：根據(jù)所使用的熒光標(biāo)記物的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)，選擇對(duì)應(yīng)的熒光濾塊或熒光通道。

奧林巴斯CKX53操作步驟

打開(kāi)照明系統(tǒng)：打開(kāi)顯微鏡后部的光源，確保照明系統(tǒng)正常工作，顯微鏡后部光源燈亮起。如果是汞燈，需要提前開(kāi)啟預(yù)熱 5-10 分鐘，以保證光源穩(wěn)定。

放置樣品：將細(xì)胞培養(yǎng)容器或載玻片平穩(wěn)放置在顯微鏡的載物臺(tái)上，使用標(biāo)本適配器或夾具固定好，確保樣品正確對(duì)齊。

取下物鏡保護(hù)蓋：取下顯微鏡載物臺(tái)上的物鏡保護(hù)蓋，準(zhǔn)備進(jìn)行觀察。

調(diào)整雙目鏡寬度：使用顯微鏡時(shí)，調(diào)整雙目鏡的寬度，使雙眼能看到同一視場(chǎng)。

移動(dòng)樣品：轉(zhuǎn)動(dòng)顯微鏡右側(cè)與載物臺(tái)相連的手柄，將樣品被觀察部位移動(dòng)到視場(chǎng)下。

粗調(diào)焦距：緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)旋鈕，當(dāng)視場(chǎng)內(nèi)出現(xiàn)模糊的圖像時(shí)，停止粗調(diào)。

微調(diào)焦距：改為轉(zhuǎn)動(dòng)微調(diào)旋鈕，直到整個(gè)視場(chǎng)內(nèi)出現(xiàn)清晰的圖像。

準(zhǔn)備熒光系統(tǒng)：從熒光照明器 CKX3 - RFA 上取下汞燈箱 U - LH100HG 或液體光導(dǎo)適配器 U - LLGAD，并插入用于反射熒光照明的光閘。

選擇熒光鏡組：握住并滑動(dòng)熒光照明器的熒光鏡組選擇拉桿，將要用于觀察的熒光鏡組轉(zhuǎn)入光路。

調(diào)節(jié)光路：更換相應(yīng)的熒光濾光片，并調(diào)整光源至適合熒光觀察的波長(zhǎng)。

調(diào)節(jié)視場(chǎng)光闌：將 B - 激發(fā)熒光鏡組轉(zhuǎn)入光路，根據(jù)需要調(diào)節(jié)視場(chǎng)光闌，以獲得最佳的熒光觀察效果，減少雜散光。

奧林巴斯CKX53觀察與記錄

熒光觀察：通過(guò)目鏡進(jìn)行觀察，調(diào)節(jié)熒光光源的強(qiáng)度和光路，使熒光圖像清晰、明亮、對(duì)比度合適。注意避免長(zhǎng)時(shí)間觀察導(dǎo)致熒光淬滅和細(xì)胞光損傷。

多通道觀察（如有需要）：如果樣本中使用了多種熒光標(biāo)記物，可通過(guò)切換不同的熒光通道，分別觀察不同熒光信號(hào)的分布和表達(dá)情況，并進(jìn)行圖像的疊加和分析。

圖像記錄：使用顯微鏡自帶的數(shù)碼相機(jī)或連接的電腦圖像采集系統(tǒng)，對(duì)觀察到的熒光圖像進(jìn)行采集和保存，合理設(shè)置曝光時(shí)間、增益等參數(shù)，以獲取清晰、準(zhǔn)確的圖像。

奧林巴斯CKX53細(xì)胞熒光觀察顯微鏡注意事項(xiàng)

熒光光源的使用：熒光光源如汞燈有一定的使用壽命，且頻繁開(kāi)關(guān)會(huì)縮短其壽命，打開(kāi)后 20 分鐘內(nèi)不得關(guān)閉，關(guān)閉后 20 分鐘之內(nèi)不得打開(kāi)。

防止熒光淬滅：在觀察過(guò)程中盡量縮短觀察時(shí)間，避免長(zhǎng)時(shí)間照射熒光樣本?？蓪⒑蠓綗晒鈸醢逭{(diào)至半遮擋狀態(tài)，減少光損傷。

樣品保存：熒光標(biāo)記的樣品應(yīng)盡快進(jìn)行觀察，避免長(zhǎng)時(shí)間放置導(dǎo)致熒光信號(hào)減弱。