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CTAB如何提取葉片DNA呢？

閱讀：1218 發(fā)布時(shí)間：2019-11-4

在生物體中核酸常與蛋白質(zhì)結(jié)合在- - 起，以核蛋白的形式存在。核酸分為脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)兩大類(lèi)，在真核細(xì)胞中，前者主要存在于細(xì)胞核中，后者主要存在于細(xì)胞質(zhì)及核仁里。在制備核酸時(shí)，通過(guò)研磨破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，使核蛋白被釋放出來(lái)。在濃氯化鈉溶液(1-2 mol/L)中， DNA核蛋白的溶解度很大，RNA核蛋白的溶解度很小:。而在稀氯化鈉溶液(0.14mol/L)中，DNA核蛋白的溶解度很小，RNA 核蛋白的溶解度很大。因此，可利用不同濃度的氯化鈉溶液將DNA核蛋白和RNA核蛋白從樣品中分別抽提出來(lái)。
分離得到核蛋白后，需進(jìn)一步將蛋白等雜質(zhì)除去，采用的去除蛋白的方法:用含異戊醇的氯f(wàn)振蕩核蛋白溶液，使其乳化，然后離心除去變性蛋白質(zhì)，此時(shí)蛋白質(zhì)凝膠停留在水相和氯f(wàn)相中間，而DNA溶于上層水相。用兩倍體積95%乙醇溶液將DNA鈉鹽沉淀出來(lái)。如果用酸性乙醇或冰乙酸來(lái)沉淀，得到的是游離的DNA.反復(fù)使用上述方法多次處理DNA核蛋白溶液，就能將蛋白等雜質(zhì)較*地除去，得到較純的DNA制品。為了*除去DNA制品中混雜的RNA，可用RNA酶處理。生物材料中含有的脂肪物質(zhì)和大部分的多糖，在用鹽溶液分離核蛋白和用乙醇或異丙醇分級(jí)沉淀時(shí)即被除去。

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