丙酮酸羧化酶（PC）檢測試劑盒

操作步驟：

一、 樣本的前處理組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離： 1、 稱取約0.1g 組織或收集500 萬細(xì)菌或細(xì)胞，加入1mL 提取液，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。 2、 將勻漿600g，4℃離心5min。 3、 棄沉淀，將上清液移另一離心管中，11000g，4℃離心10min。 4、 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的PC（此步可選做）。 5、 在步驟④的沉淀中加入1mL 提取液，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10 秒，重復(fù)30 次），用于線粒體PC 活性測定。

二、測定步驟 1、 分光光度計預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 工作液的配制：臨用前將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用；置于37℃(哺乳動物) 或25℃(其它物種)預(yù)熱5 分鐘；用不完的試劑4℃保存一周；試劑四的配制：在試劑四瓶中加入2.5mL 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存一周；

3、 在1mL 石英比色皿中加入50μL 樣本、50μL 試劑四和900μL 工作液，立即混勻，記錄340nm 處初始吸光值A(chǔ)1 和 2min 后的吸光值A(chǔ)2，計算A=A1-A2。注意：在該試劑盒中，若ΔA 大于0.5，需將樣本用提取液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后測定，使ΔA 小于0.5 可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

丙酮酸羧化酶（PC）檢測試劑盒

PC 活性計算：（1） 按樣本蛋白濃度計算單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 PC（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr （2） 按樣本鮮重計算單位定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 PC（U/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T=1608×ΔA÷W （3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：單位定義：每1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 PC（U/10 4 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=3.215×ΔA V 反總：反應(yīng)體系總體積，1×10 -3 L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10 3 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.05 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，2 min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。

PC 活性計算：（1） 按樣本蛋白濃度計算單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 PC（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr （2） 按樣本鮮重計算單位定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 PC（U/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T=1608×ΔA÷W （3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：單位定義：每1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 PC（U/10 4 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=3.215×ΔA V 反總：反應(yīng)體系總體積，1×10 -3 L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10 3 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.05 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，2 min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。

相關(guān)文獻(xiàn)：

《Inhibition of?α?ketoglutarate dehydrogenase activity afects adventitious root growth in?poplar via?changes in?GABA shunt》 作者:Jianyun?Yue,Changjian?Du,Jing?Ji,Tiantian?Xie, Wei?Chen,Ermei?Chang, Lanzhen?Chen, Zeping?Jiang,Shengqing?Shi
 期刊:Planta 影響因子:3.06 PMID:
《lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma》 作者:Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, Wenwen Wang ,Di Zhang ,Zhen Li, Chengyong Qin 期刊:International Journal of Oncology 影響因子:3.571 PMID:29845188