土壤中性蛋白酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

土壤中性蛋白酶活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法

產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓
英文名稱：Soil neutral protease activity detection kit
產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
貨號(hào)：BC0275
規(guī)格：100T/48S
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            
參考價(jià)格：1380
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵詞：土壤中性蛋白酶|土壤中性蛋白酶活性檢測(cè)|蛋白酶活性檢測(cè)
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入10mL試劑一，沸水浴攪拌溶解后待用；
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入10mL 蒸餾水充分溶解待用；
試劑四：液體20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑五：液體5mL×1 瓶，4℃保存；
標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1 支，0.2 μmol/mL 酪氨酸溶液，4℃保存。

產(chǎn)品說(shuō)明：
土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機(jī)化合物的轉(zhuǎn)化，其水解產(chǎn)物是高等植物的氮源之一。土壤中性蛋白酶在中性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解，與土壤有機(jī)質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān)。中性條件下，土壤中性蛋白酶可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪氨酸；在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍(lán)，在680nm 有特征吸收峰。

實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量比色皿/96孔板、甲苯、蒸餾水、50目篩（或更?。?。

樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過(guò)30~50 目篩。

操作步驟：
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)680nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測(cè)定：
試劑名稱         測(cè)定管               對(duì)照管         標(biāo)準(zhǔn)管              空白管
風(fēng)干土樣（g）      0.05                 0.05            -                   -
試劑一（μL）       50                   50             -                   -
試劑二（μL）       100                                 -                   -
                  混勻后，37℃反應(yīng)24h，期間振蕩5-6 次，使土樣與反應(yīng)液充分接觸。
試劑三（μL）       100                  100            -                   -
試劑二（μL）        -                   100            -                   -
                           混勻，10000rpm 室溫離心10min，取上清液
上清液（μL）         44                   44            -                   -
標(biāo)準(zhǔn)液（μL）         -                    -             44                  -
蒸餾水（μL）         -                    -             -                  44
試劑四（μL）        130                  130            130               130
試劑五（μL）         26                   26             26                26

混勻，40℃水浴10min，10000rpm 室溫離心10min，取上清液于680nm 下讀取各管吸光值A(chǔ)，分別記為A 測(cè)定管、A 對(duì)照管、A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 空白管，計(jì)算ΔA 測(cè)定=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管，ΔA 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。

注意：標(biāo)準(zhǔn)管、空白管只需測(cè)一次。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

土壤中性蛋白酶活性計(jì)算：
單位定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol 酪氨酸為一個(gè)土壤中性蛋白酶活力單位。土壤中性蛋白酶(U/g)=C標(biāo)準(zhǔn)×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V 反總÷W÷T= 0.05×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W。
C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.2 μmol/mL；
V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.25mL；
T：反應(yīng)時(shí)間，1d；
W：樣本質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：
1、當(dāng)吸光值大于1.5時(shí)，建議將上清液稀釋后進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算時(shí)注意乘以稀釋倍數(shù)。
 

相關(guān)文獻(xiàn)： 

《Evaluating the effects of phytoremediation with biochar additions on soil nitrogen mineralization enzymes and fungi》 作者:Manyun Zhang,Jun Wang, Shahla Hosseini Bai, Ying Teng,Zhihong Xu 期刊:Environmental Science and Pollution Research 影響因子:2.914 PMID:29860689

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