目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化指標(biāo)檢測(cè)試劑盒>>生化試劑盒>> BC0610α-淀粉酶活性檢測(cè)試劑盒
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更新時(shí)間:2024-08-25 09:46:25瀏覽次數(shù):1433評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50管/24樣 |
---|---|---|---|
貨號(hào) | BC0610 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),石油 |
主要用途 | α-淀粉酶活性檢測(cè) |
產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣 產(chǎn)品商標(biāo):solarbio
保存與運(yùn)輸:4℃保存或-20℃保存; 參考價(jià)格:450
庫(kù)存狀態(tài):現(xiàn)貨
關(guān)鍵字: α-淀粉酶檢測(cè)試劑盒|淀粉酶檢測(cè)試劑盒|α-淀粉酶|試劑盒
簡(jiǎn)要介紹:
淀粉酶負(fù)責(zé)水解淀粉,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可隨機(jī)地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵,生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖,同時(shí)使淀粉的粘度降低,因此又稱為液化酶。
還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。β-淀粉酶不耐熱,在70℃鈍化15min,從而測(cè)定α-淀粉酶活性。
產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容:
試劑一:液體40mL×1瓶,常溫保存,若有黃色晶體析出,需加熱溶解后再用;
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入20mL蒸餾水,置于常溫水中并加熱煮沸,期間不斷攪拌粉劑溶解;
標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1支,10mg無(wú)水葡萄糖。
產(chǎn)品說(shuō)明:
淀粉酶負(fù)責(zé)水解淀粉,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可隨機(jī)地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵,生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖,同時(shí)使淀粉的粘度降低,因此又稱為液化酶。
淀粉水解酶催化淀粉水解生成還原糖,還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì),在540 nm有吸收峰;通過(guò)測(cè)定540 nm吸光度增加速率,計(jì)算淀粉酶活性。α-AL耐熱,但是β-淀粉酶可在70℃鈍化15min。因此粗酶液經(jīng)過(guò)70℃鈍化15min,就只有α-AL能夠催化淀粉水解。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。
操作步驟:
一、粗酶液提?。?/span>
稱取約0.1g樣本,加0.8mL蒸餾水勻漿;勻漿后在室溫下放置提取15min,每隔5min振蕩1次,使其充分提??;6000g,常溫離心10min,吸取上清液并加蒸餾水定容10 mL,搖勻,即為淀粉酶原液。
二、測(cè)定步驟和加樣表:
試劑(μL) | 對(duì)照管 | 測(cè)定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 | |
α淀粉酶原液 | 250 | 250 | - | - | |
蒸餾水 | - | - | - | 250 | |
標(biāo)準(zhǔn)溶液(mg/mL) | - | - | 250 | - | |
70℃水浴15min左右,冷卻 | |||||
試劑一 | 500 | - | - | - | |
將以上對(duì)照管、測(cè)定管和試劑二置于40℃恒溫水浴中保溫10min左右 | |||||
試劑二 | 250 | 250 | 250 | 250 | |
在40℃恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫5min | |||||
試劑一 | - | 500 | 500 | 500 |
混勻,90℃水浴10min,蒸餾水調(diào)零,540nm處讀取對(duì)照管、測(cè)定管、標(biāo)準(zhǔn)管、空白管吸光度,分別記為A對(duì)照、A測(cè)定、A標(biāo)準(zhǔn)和A空白,計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。
三、α-淀粉酶活性計(jì)算:
以ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸,以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為x軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到方程y=kx+b。將
ΔA測(cè)定帶入方程得到x(mg/mL)。
2、α淀粉酶活性的計(jì)算
(1)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
單位定義:每g 組織每分鐘催化產(chǎn)生1mg 還原糖定義為1 個(gè)酶活力單位。
α- 淀粉酶活性(mg/min/g 鮮重)=x×V 樣÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=2×x÷W
(2)按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算
單位定義:每mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1mg 還原糖定義為1 個(gè)酶活性單位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= x×V 樣÷(V 樣×Cpr)÷T==0.2×x÷Cpr
(3)血清(漿)樣本中α-淀粉酶活性計(jì)算
單位定義:每ml血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1mg 還原糖定義為1 個(gè)酶活性單位。
α-淀粉酶活性(mg/ml)= x÷T=0.2×x
V 樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.25 mL;V 樣總:提取液總體積,10 mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,5min。
注意事項(xiàng):
當(dāng)測(cè)定的吸光值大于1時(shí),可以對(duì)樣本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后測(cè)定。
相關(guān)文獻(xiàn):
《Effects of extraction methods on the physicochemical characteristics and biological activities of polysaccharides from okra (Abelmoschus esculentus)》 作者:QinYuan1ShangLin1YuanFuXi-RuiNieWenLiuYanSuQiao-HongHanLiZhaoQingZhangDe-RongLinWenQinDing-TaoWu 期刊:International Journal of Biological Macromolecules 影響因子:3.909 PMID:30639655
α-淀粉酶活性檢測(cè)試劑盒
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