員.png)
12
大鼠細(xì)胞間粘附分子1試劑盒
大鼠細(xì)胞間粘附分子1試劑盒主要有 ELISA 試劑盒和化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒等類型，以下以 ELISA 試劑盒為例介紹：
檢測原理
通常采用雙抗體夾心法。將純化的大鼠抗細(xì)胞間粘附分子 1 抗體包被于微孔板，制成固相抗體，加入含細(xì)胞間粘附分子 1 的樣品，再與 HRP 標(biāo)記的 ICAM-1 抗體結(jié)合，形成抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)洗滌后加底物 TMB 顯色，TMB 在 HRP 酶催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，在酸作用下轉(zhuǎn)化為黃色，顏色深淺和樣品中的細(xì)胞間粘附分子 1 呈正相關(guān)，用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中 ICAM-1 含量。
標(biāo)本類型
血清、血漿、細(xì)胞上清液、腦脊液、腹腔液等。
操作步驟
以慧嘉生物的試劑盒為例：
進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣，設(shè)置不同濃度梯度。
加樣，分別設(shè)空白孔、待測樣品孔，加樣至酶標(biāo)板孔底部并輕輕混勻。
用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。
小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。
每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
再次 37℃溫育。
重復(fù)洗滌步驟。
每孔先加入顯色劑 A 50μl，再加入顯色劑 B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15 分鐘。
每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)。
以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度。
注意事項(xiàng)
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，一次加樣時(shí)間控制在 5 分鐘內(nèi)。
標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高時(shí)，需先稀釋后再測定，計(jì)算時(shí)乘以總稀釋倍數(shù)。
封板膜只限一次性使用。
底物請避光保存，嚴(yán)格按說明書操作，試驗(yàn)結(jié)果以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。