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關鍵詞:原位雜交檢測技術服務|實驗技術服務
簡介:世界*品牌原位雜交檢測技術服務|實驗技術服務原裝,質(zhì)量保證,*。
原位雜交檢測技術服務|實驗技術服務——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經(jīng)驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產(chǎn)品品牌: http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序實驗流程:
(1)樣品的固定;
(2)樣品的制備和預處理;
(3)預雜交;
(4)探針和樣品變性;
(5)用不同的探針雜交以檢測不同的靶序列;
(6)漂洗去除未結合的探針;
(7)檢測雜交信號,進行結果分析
(1)石蠟切片(5 um),常規(guī)脫蠟水化: 二甲苯10min×3次、質(zhì)量濃度為100%乙醇5 min×2次、95%乙醇5 min、70%乙醇5min、50%乙醇5 min、自來水洗5 min。
(2)正常山羊血清封閉,37℃ ,30min;
(3)加入I抗(兔抗鼠白蛋白),37℃ ,1 h;
(4)Ⅱ抗(FITC標記,羊抗兔IgG,),37℃ ,30min;
(5)8%硫氰酸鈉,80℃ ,10 min;
Devil以新鮮配制的胃蛋白酶(4 mg/m1)將切片于37℃消化1~1.5 h;以甘氨酸溶液終止消化
(7)4%多聚甲醛固定2 min;梯度酒精脫水,空氣干燥;
Musical Note將15ul Y染色體探針(cy3標記)加于組織上,蓋上蓋片,置于雜交盒內(nèi),60℃變性10 min;37℃ ,避光雜交;
(9)50%甲酰胺/2×SSC,37℃洗滌5 min;2×SSC,37℃洗滌5 min;
(10)0.1% 吐溫20/4×SSC,37℃洗滌10 min,干燥后鏡檢。
雜交所用的探針大致可以分類三類:
1)染色體特異重復序列探針,例如α衛(wèi)星、衛(wèi)星III類的探針,其雜交靶位常大于1Mb,不含散在重復序列,與靶位結合緊密,雜交信號強,易于檢測;
2)全染色體或染色體區(qū)域特異性探針,其由一條染色體或染色體上某一區(qū)段上不同的核苷酸片段所組成,可由克隆到噬菌體和質(zhì)粒中的染色體特異大片段獲得;
3)特異性位置探針,由一個或幾個克隆序列組成。
可采用不同類型的封片液。如果封片液中不含有Mowiol(可使封片液產(chǎn)生自封閉作用),為防止蓋片與載片之間的溶液揮發(fā),可使用指甲油將蓋片周圍封閉。封好的玻片標本可以在-20~-70℃的冰箱中的暗盒中保持數(shù)月之久。
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