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Nuclear Factor-kappa B ELISA KIT
Nuclear Factor-kappa B ELISA KIT是一類廣泛存在于細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄因子，在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖與凋亡等眾多生理和病理過程中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)控作用。NF-κB ELISA KIT 作為定量檢測(cè)樣本中 NF-κB 含量的有力工具，在科研及臨床研究領(lǐng)域具有重要意義。
該試劑盒主要基于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）原理。以常見的雙抗體夾心法為例，首先將針對(duì) NF-κB 的特異性捕獲抗體包被在固相載體（如 96 孔酶標(biāo)板）表面。加入待檢測(cè)樣本（如細(xì)胞裂解液、組織勻漿等）后，樣本中的 NF-κB 會(huì)與固相抗體特異性結(jié)合。接著，加入酶標(biāo)記的另一種 NF-κB 特異性檢測(cè)抗體，形成 “固相抗體 - NF-κB - 酶標(biāo)抗體" 的免疫復(fù)合物。經(jīng)過多次洗滌步驟，去除未結(jié)合的物質(zhì)，隨后加入酶的底物。酶催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，顏色的深淺與樣本中 NF-κB 的含量成正比。通過酶標(biāo)儀測(cè)定特定波長(zhǎng)下反應(yīng)體系的吸光度，再依據(jù)預(yù)先繪制好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可精確計(jì)算出樣本中 NF-κB 的濃度。
使用該試劑盒的操作流程相對(duì)嚴(yán)謹(jǐn)。樣本收集后需進(jìn)行適當(dāng)預(yù)處理，比如細(xì)胞樣本要經(jīng)裂解處理釋放出胞內(nèi)的 NF-κB，組織樣本需制備成勻漿狀態(tài)，同時(shí)要確保樣本中的 NF-κB 保持活性且不受其他因素干擾。之后按照試劑盒說明書，依次進(jìn)行加樣，將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加入相應(yīng)孔位；接著進(jìn)行孵育，讓抗原抗體充分反應(yīng)；隨后進(jìn)行多次洗滌，去除未結(jié)合成分；再加入酶標(biāo)抗體并再次孵育；再次洗滌后加入底物顯色；最后在規(guī)定時(shí)間內(nèi)用酶標(biāo)儀讀取吸光度并分析結(jié)果。
在應(yīng)用方面，科研人員利用 NF-κB ELISA KIT 研究炎癥性疾病發(fā)病機(jī)制，因?yàn)?NF-κB 過度激活常與炎癥持續(xù)發(fā)展相關(guān)。在腫瘤研究中，檢測(cè)腫瘤細(xì)胞或患者血清中的 NF-κB 水平，有助于了解腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移機(jī)制，為開發(fā)新的治療策略提供依據(jù)。同時(shí)，在藥物研發(fā)過程中，可借助該試劑盒評(píng)估藥物對(duì) NF-κB 信號(hào)通路的影響，篩選有效的治療藥物。NF-κB ELISA KIT 憑借其準(zhǔn)確、高效的檢測(cè)特性，為相關(guān)領(lǐng)域的研究與探索提供了重要支撐。