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NAP ELISA
NAP ELISA即針對中性粒細胞激活蛋白（Neutrophil Activating Protein，NAP）的酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)，在免疫學(xué)、炎癥相關(guān)疾病研究及臨床診斷領(lǐng)域至關(guān)重要。NAP 是一類能有效激活中性粒細胞，使其發(fā)揮免疫防御作用的蛋白質(zhì)，在炎癥反應(yīng)的起始與發(fā)展進程中扮演關(guān)鍵角色，其含量變化與多種炎癥性病癥緊密相連。
該技術(shù)基于抗原與抗體特異性結(jié)合的免疫學(xué)原理。在 NAP 試劑盒中，酶標(biāo)板預(yù)先包被了針對 NAP 的特異性抗體。當(dāng)含有 NAP 的樣本，如血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿等加入酶標(biāo)板孔后，樣本中的 NAP 會迅速與包被抗體特異性結(jié)合。隨后加入酶標(biāo)記的另一種針對 NAP 不同抗原表位的檢測抗體，形成穩(wěn)定的 “包被抗體 - NAP - 酶標(biāo)抗體" 三明治結(jié)構(gòu)。接著添加酶的底物，酶標(biāo)抗體上的酶催化底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生可檢測的信號，常見為顏色變化或熒光信號。通過酶標(biāo)儀測量信號強度，并與試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線對比，即可精確計算出樣本中 NAP 的含量。
NAP 試劑盒的組成較為全面，一般包含預(yù)包被抗體的酶標(biāo)板，不同濃度的 NAP 標(biāo)準(zhǔn)品用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，酶標(biāo)抗體工作液、底物、終止液，以及用于清洗未結(jié)合物質(zhì)的濃縮洗滌液等。同時，配備詳細的操作說明書，為實驗人員提供從樣本采集、處理，到實驗步驟、結(jié)果判讀等全fang位準(zhǔn)確的操作指導(dǎo)。
在操作流程上，首先要依據(jù)研究目的采集合適樣本。若研究全身性炎癥反應(yīng)，血清或血漿樣本較為常用；若關(guān)注局部炎癥，組織勻漿或細胞培養(yǎng)上清樣本可能更具針對性。采集后的樣本需及時進行離心等處理以獲取清亮的待測液。將樣本和試劑盒中的試劑平衡至室溫后，嚴(yán)格按照要求對樣本及試劑進行準(zhǔn)確稀釋。然后精確加樣到酶標(biāo)板，在適宜溫度下溫育一段時間，確保抗原抗體充分反應(yīng)。之后用洗滌液多次洗滌酶標(biāo)板，徹di去除未結(jié)合物質(zhì)，減少非特異性信號干擾。接著依次加入酶標(biāo)抗體工作液、底物，按規(guī)定時間反應(yīng)，最后加入終止液終止反應(yīng)，并立即用酶標(biāo)儀檢測信號。
NAP試劑盒 技術(shù)具有操作簡便、靈敏度高、特異性強、重復(fù)性好等優(yōu)勢。在基礎(chǔ)免疫學(xué)研究中，有助于深入探究 NAP 在炎癥反應(yīng)級聯(lián)過程中的作用機制，以及其與其他免疫細胞和炎癥介質(zhì)的相互關(guān)系。在臨床應(yīng)用方面，可輔助多種炎癥性疾病的診斷、病情監(jiān)測及預(yù)后評估，例如在感染性疾病、自身免疫性疾病如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等研究中，通過檢測 NAP 含量變化，能為疾病的診療方案制定提供重要依據(jù) 。