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NCAM-1 ELISA
NCAM-1 ELISA，即針對(duì)神經(jīng)細(xì)胞黏附分子 1（NCAM - 1）所采用的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定技術(shù)，在神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域及相關(guān)醫(yī)學(xué)研究中有著舉足輕重的地位。NCAM - 1 屬于免疫球蛋白超家族成員，廣泛存在于神經(jīng)細(xì)胞表面，對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的發(fā)育、遷移、分化，以及突觸的形成與可塑性等過(guò)程發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其表達(dá)水平的變化與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病緊密相連。
該技術(shù)依托抗原與抗體特異性結(jié)合的免疫學(xué)基礎(chǔ)。在 NCAM - 1試劑盒中，酶標(biāo)板預(yù)先包被有針對(duì) NCAM - 1 的特異性抗體。當(dāng)含有 NCAM - 1 的樣本，比如腦脊液、血清、組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清等加入酶標(biāo)板孔后，樣本里的 NCAM - 1 會(huì)迅速與包被抗體特異性結(jié)合。緊接著，加入酶標(biāo)記的另一種針對(duì) NCAM - 1 不同抗原表位的檢測(cè)抗體，從而形成穩(wěn)定的 “包被抗體 - NCAM - 1 - 酶標(biāo)抗體" 三明治結(jié)構(gòu)。隨后添加酶的底物，酶標(biāo)抗體上的酶催化底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生可檢測(cè)的信號(hào)，常見(jiàn)表現(xiàn)為顏色變化或熒光信號(hào)。通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)量信號(hào)強(qiáng)度，并與試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線相對(duì)比，就能精準(zhǔn)算出樣本中 NCAM - 1 的含量。
NCAM - 1 試劑盒的構(gòu)成較為豐富，通常包含預(yù)包被抗體的酶標(biāo)板，不同濃度的 NCAM - 1 標(biāo)準(zhǔn)品用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，酶標(biāo)抗體工作液、底物、終止液，還有用于清洗未結(jié)合物質(zhì)的濃縮洗滌液等。同時(shí)，配有詳細(xì)的操作說(shuō)明書(shū)，為實(shí)驗(yàn)人員提供從樣本采集、處理，到實(shí)驗(yàn)步驟、結(jié)果判讀等全fang位的準(zhǔn)確指導(dǎo)。
在操作過(guò)程中，首先要依據(jù)研究目的采集合適樣本，若聚焦中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，腦脊液樣本更具針對(duì)性；若關(guān)注全身性疾病對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的影響，血清樣本較為常用。采集后的樣本需及時(shí)進(jìn)行離心等處理以獲得清亮的待測(cè)液。將樣本和試劑盒中的試劑平衡至室溫后，嚴(yán)格按照要求準(zhǔn)確稀釋樣本及試劑。然后精準(zhǔn)加樣到酶標(biāo)板，在適宜溫度下溫育一定時(shí)間，保證抗原抗體充分反應(yīng)。之后用洗滌液多次洗滌酶標(biāo)板，徹di清除未結(jié)合物質(zhì)，降低非特異性信號(hào)干擾。接著依次加入酶標(biāo)抗體工作液、底物，按規(guī)定時(shí)間反應(yīng)，最后加入終止液終止反應(yīng)，并立刻用酶標(biāo)儀檢測(cè)信號(hào)。
NCAM - 1 試劑盒技術(shù)具備操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。在基礎(chǔ)神經(jīng)科學(xué)研究中，有助于深入剖析 NCAM - 1 在正常神經(jīng)發(fā)育以及疾病狀態(tài)下的作用機(jī)制。在臨床應(yīng)用方面，可輔助多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的診斷、病情監(jiān)測(cè)及預(yù)后評(píng)估，例如在阿爾茨海默病、帕金森病、腦損傷修復(fù)等研究中，通過(guò)檢測(cè) NCAM - 1 含量變化，能為疾病的診療方案制定提供關(guān)鍵依據(jù) 。