關(guān)鍵詞:MiRNA定量PCR|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌MiRNA定量PCR|實驗技術(shù)服務(wù)原裝，質(zhì)量保證,*。
MiRNA定量PCR|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>實時熒光定量PCR
從1996年美國AppliedBiosystems公司推出實時熒光定量PCR技術(shù)以來，該技術(shù)已經(jīng)越來越廣泛的應(yīng)用到各類RNA的研究中，成為研究RNA*的實驗手段之一。目前比較常用的方法有兩種：
（1）TaqMan熒光探針法：該方法在特異性探針的兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。當(dāng)探針完整時，熒光基團發(fā)光被淬滅基團吸收；在PCR擴增過程中，探針被降解，熒光基團與淬滅基團分離，發(fā)出可被檢測到的熒光，以此來監(jiān)測整個PCR過程。
（2）SYBR熒光染料法：該方法利用了SYBRGreen熒光染料非特異性與雙鏈DNA結(jié)合并發(fā)光的特性，檢測PCR的全部進程，從而判定初始RNA的量。
常用的miRNA*鏈合成方法
成熟的miRNA大小只有22 nt左右，在用實時熒光定量PCR檢測miRNA時，難點在于如何識別如此小的miRNA并合成*鏈。目前常用的用于識別并合成miRNA*鏈的方法主要有頸環(huán)法和加尾法兩種。
由于成熟miRNA較小，無法用常規(guī)的方法直接進行反轉(zhuǎn)錄、PCR。所以上述兩種方法分別加PolyA尾及頸環(huán)結(jié)構(gòu)的方法，將miRNA配對的序列延長，然后進行正常的反轉(zhuǎn)錄及后續(xù)的PCR檢測。頸環(huán)法只針對成熟miRNA，特異性相對較高，但操作繁瑣，成本較高；加尾法可以檢測到成熟miRNA及pre-miRNA，特異性稍低，但操作及引物設(shè)計簡單。
近年來，研究人員發(fā)現(xiàn)了越來越多的miRNA，其中有很多miRNA序列相近，有的僅僅只有一個堿基差異。這些不同的miRNA雖然序列相近，但是也有著不同的來源及功能。上述兩種方法雖然解決了miRNA的識別及后續(xù)PCR問題，但是無法分辨這些只有一個或者兩個堿基差異的miRNA。美國Signosis推出了一種新的miRNA識別方法，可以分辨僅有單個堿基差異的miRNA。 
美國Signosis推出的新方法，使用多對寡核苷酸對目的miRNA進行識別，單個堿基差異就可以破壞寡核苷酸與靶標(biāo)序列的結(jié)合，從而分辨單個堿基差異的miRNA；同時該方法不用進行方轉(zhuǎn)錄，避免了反轉(zhuǎn)錄過程中出現(xiàn)錯配的可能；同時，這個新方法還引入了磁珠分離技術(shù)，在進行PCR前，通過結(jié)合有鏈霉親和素的磁珠對特異性標(biāo)記有生物素的靶標(biāo)序列進行純化，大大提高了特異性。