關鍵詞:MTT檢測技術服務|實驗技術服務
簡介：世界*品牌MTT檢測技術服務|實驗技術服務原裝，質量保證,*。
MTT檢測技術服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經(jīng)驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時，我們也會提供相應的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗。另一方面，我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產(chǎn)品品牌：   http://www.。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程：
MTT為黃色化合物，是一種接受氫離子的染料，在活細胞中作用于線粒體的呼吸鏈，MTT在琥珀酸脫氫酶和細胞色素C的作用下生成藍色的formazan結晶，formazan結晶的生成量與活細胞數(shù)目成正比，生成的formazan結晶可溶解在DMSO中，利用酶標儀測定570 nm處的光密度OD值，可以反映出活細胞數(shù)目和細胞活力。死細胞中由于沒有琥珀酸脫氫酶，因此不能還原MTT生成formazan結晶。
優(yōu)點：經(jīng)濟、靈敏度高，可用于大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。
缺點：由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的formazan結晶產(chǎn)物不溶于水，需有機溶劑溶解后才能檢測，這不僅使工作量增加，也會對實驗結果的準確性產(chǎn)生影響，而且有機溶劑對實驗人員也有損害。
①將對數(shù)生長期的細胞濃度調(diào)整為1~10×104細胞/ml，按103~104個細胞接種于96孔板，每孔100 μl；
②培養(yǎng)細胞24小時后，對其進行不同處理，每個處理設三個平行對照；
③（MTT法）適當培養(yǎng)時間后，取出細胞，倒掉培養(yǎng)液，每孔加入5 mg/ml新鮮配制的MTT溶液，溫育4小時，再次倒掉上清液，每孔加入200 ml DMSO，搖勻后，酶標儀檢測吸光值。
③（臺盼藍拒染法）適當培養(yǎng)時間后，收集細胞，經(jīng)臺盼藍染色，在倒置顯微鏡下計數(shù)藍染及不染色細胞，計算細胞存活率。
操作步驟：
1、無菌條件下取新生一天的SD大鼠DRG。
2、鏡下去除神經(jīng)根和外膜，接種于預先涂有L-多聚賴氨酸的96孔培養(yǎng)板中，每孔1個DRG。
3、待DRG貼壁后加入100μl無血清L15基礎培養(yǎng)基，實驗組加入純化的表達蛋白（分別以不同的蛋白濃度），陰性對照加入等體積的溶解表達蛋白的溶劑。
4、37℃ 5%CO2培養(yǎng)，每天在Olympus倒置顯微鏡下觀察細胞的生長情況，并進行測量，其數(shù)據(jù)作統(tǒng)計分析。
注意事項
1、選擇適當?shù)眉毎臃N濃度。
2、避免血清干擾：一般選小于10%的胎牛血清的培養(yǎng)液進行試驗。在呈色后盡量吸盡孔內(nèi)殘余培養(yǎng)液。
3、設空白對照：與試驗平行不加細胞只加培養(yǎng)液的空白對照。其他試驗步驟保持一致，zui后比色以空白調(diào)零。
MTT實驗吸光度zui后要在0-0.7之間，超出這個范圍就不是直線關系,IC50是半抑制率，意思是抑制率50％的時候藥物的濃度。把藥品稀釋成不同的濃度，然后計算各自的抑制率，以藥品的濃度為橫坐標，抑制率為縱坐標作圖，然后得到50％抑制率時候的藥品濃度，就是IC50。要點：藥品2倍稀釋，多做梯度.