關(guān)鍵詞:Transwell實(shí)驗(yàn)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡(jiǎn)介：世界*品牌Transwell實(shí)驗(yàn)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝，質(zhì)量保證,*。
Transwell實(shí)驗(yàn)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧，承諾客戶不成功不收費(fèi)。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時(shí)，我們也會(huì)提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費(fèi)精力重復(fù)實(shí)驗(yàn)。另一方面，我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：   http://www.。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
細(xì)胞種在上室內(nèi)，因聚碳酸酯膜有通透性，故可研究下層培養(yǎng)液中的成分對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)等的影響。
根據(jù)transwell的特點(diǎn)（孔徑，膜），可進(jìn)行如下方面研究：
1.共培養(yǎng)                   孔徑<3.0um
研究下室細(xì)胞B代謝物（分泌物）對(duì)上室細(xì)胞A的影響。
2.細(xì)胞趨化               孔徑可選擇5.0、8.0、12.0μm
研究進(jìn)入下室的細(xì)胞量，反映下室成分對(duì)上室細(xì)胞的趨化能力
3.細(xì)胞遷移               孔徑常選擇8.0、12.0μm
研究進(jìn)入下室的細(xì)胞量，反應(yīng)上室細(xì)胞的遷移能力
4.細(xì)胞侵襲               孔徑常選擇8.0、12.0μm，膜上室側(cè)鋪有基質(zhì)膠，
研究進(jìn)入下室的細(xì)胞量，反映上室細(xì)胞的侵襲能力
一、腫瘤細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)（transwell）
原理：
模仿體內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)，細(xì)胞只有分泌基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs），降解基質(zhì)膠才可進(jìn)入下室。
步驟
1.  Transwell小室準(zhǔn)備
1）無(wú)基質(zhì)膠Transwell小室制備
A. 包被基底膜：
A. Matrigel (50mg/L)按1:8稀釋，無(wú)血清培養(yǎng)基作為稀釋液
B. 取適量加入Transwell小室中(24孔板transwell小室加100 ul)，4℃操作。
C. 37℃培養(yǎng)箱中，孵育4-5h（>5h）；出現(xiàn)“白色層"時(shí)，說(shuō)明已經(jīng)變?yōu)楣虘B(tài)。
2）有基質(zhì)膠Transwell小室制備
A. 小室放入培養(yǎng)板中，上室加入300μl預(yù)溫的無(wú)血清培養(yǎng)基
B. 室溫下靜置15－30min，使基質(zhì)膠再水化
C. 再吸去剩余培養(yǎng)液。
2．細(xì)胞懸液準(zhǔn)備
1）消化、收集細(xì)胞；
2）PBS洗1－2次
3）用含BSA的無(wú)血清培養(yǎng)基重懸（細(xì)胞密度約在1－10×105/ml）。
3. 細(xì)胞接種
1）取適量細(xì)胞懸液加入Transwell小室（按transwell說(shuō)明）。24孔板小室一般200μl。
2）24孔板下室一般加入500μl含F(xiàn)BS或趨化因子的培養(yǎng)基。注意避免氣泡產(chǎn)生（下層培養(yǎng)液和小室間）
3） 培養(yǎng)細(xì)胞：常規(guī)培養(yǎng)12－48h（主要依癌細(xì)胞侵襲能力而定）。
4. 結(jié)果統(tǒng)計(jì)