關鍵詞:Western Blot服務|實驗技術服務
簡介:世界*品牌Western Blot服務|實驗技術服務原裝,質量保證,*。
Western Blot服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產品的同時,我們也會提供相應的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗。另一方面,我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌: http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序實驗流程:
免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質印跡(western blot),它是根據(jù)抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。western blot是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術。由于免疫印跡(western blot)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性,現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術。免疫印跡(western blot)常用于鑒定某種蛋白,并能對蛋白進行定性和半定量分析。
1,蛋白質抽提
實驗對象為組織樣品,取適量(250~500mg)新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品,加1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑(或核蛋白抽提試劑),勻漿后抽提總蛋白(或核蛋白)。
實驗對象為細胞樣品,每份樣品取1×106~1×107細胞,PBS清洗細胞,去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑(或核蛋白抽提試劑)抽提總蛋白(或核蛋白)。
2. 蛋白質定量:按BCA蛋白質定量試劑盒操作說明操作,測定樣品濃度。
3. 變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠電泳(SDS-PAGE):將準備好的樣品液和預染蛋白marker分別上樣,標準加進*個孔中,電泳分離蛋白。
4. 蛋白質轉移到PVDF膜,按Bio-Rad蛋白轉移裝置說明組裝濾紙凝膠纖維素夾層,30mA恒流條件下,4°C轉移。
5. western blot膜的封閉和抗體孵育
膜在5%脫脂奶粉溶液中室溫孵育1小時以封閉膜上的非特異結合。
封閉過的膜加入一抗室溫孵育1.5小時,抗原抗體結合。
加入HRP標記的二抗體以結合一抗,室溫孵育膜1小時。加入HRP標記的GAPDH抗體可同時檢測GAPDH含量。
6. western blot結果檢測:化學發(fā)光法檢測,膜與化學發(fā)光底物孵育,經X膠片曝光顯影。圖片掃描保存為電腦文件,并用GIS1000分析軟件將圖片上每個特異條帶灰度值的數(shù)字化。
7. western blot數(shù)據(jù)分析:目的蛋白的灰度值除以內參GAPDH/Actin的灰度值以校正誤差,所得結果代表某樣品的目的蛋白相對含量。
8. 提供實驗報告,包括詳細的實驗方法及免疫印跡實驗結果的相關數(shù)據(jù)。
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