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多肽合成|實驗技術(shù)服務(wù)

時間:2015-7-1閱讀:121

關(guān)鍵詞:多肽合成|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介:世界*品牌多肽合成|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
多肽合成|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>多肽是一種與生物體內(nèi)各種細胞功能都相關(guān)的生物活性物質(zhì),它的分子結(jié)構(gòu)介于氨基酸和蛋白質(zhì)之間,是由多種氨基酸按照一定的排列順序通過肽鍵結(jié)合而成的化合物。多肽是涉及生物體內(nèi)各種細胞功能的生物活性物質(zhì)的總稱,常常被應(yīng)用于功能分析、抗體研究、尤其是藥物研發(fā)等領(lǐng)域。
具體合成由下列幾個循環(huán)組成:
1) 去保護:Fmoc保護的柱子和單體必須用一種堿性溶劑(piperidine)去 除氨基的保護基團。
2) 激活和交聯(lián):下一個氨基酸的羧基被一種活化劑所活化?;罨膯误w與游離的氨基反應(yīng)交聯(lián),形成肽鍵。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅(qū)使反應(yīng)完成。循環(huán):這兩步反應(yīng)反復(fù)循環(huán)直到合成完成。
3) 洗脫和脫保護:多肽從柱上洗脫下來,其保護基團被一種脫保護劑(TFA) 洗脫和脫保護。
試劑檢測:沒有選購在線檢測附件的多肽合成儀用戶,也可以采用試劑檢測方法做基本的耦合效果測定實驗。
固相多肽合成中,主要是通過檢測樹脂上游離氨基來判斷連接效率,檢測方法稱為Kaiser方法,其檢測結(jié)果,如果有游離氨基的時候,顯示蘭色,或紅褐色(pro,ser,His)。
Kaiser試劑包括:A,6% 茚三酮的乙醇溶液;B,80% 苯酚的乙醇溶液;C,2% 0.001M KCN的吡啶溶液
配制中的吡啶需要經(jīng)過茚三酮處理后,重蒸后再使用。檢測過程,取少量樹脂,加入A,B,C各2-3滴,100℃下加熱1-2min,如果溶液有蘭色,或樹脂出現(xiàn)蘭色,紅褐色,表明還有游離氨基,否則說明連接*。
其它檢測游離氨基的方法:三硝基苯磺酸法,苦味酸法,溴芬蘭法等.
氨基酸保護基 
20種常見氨基酸,根據(jù)側(cè)鏈可以分為幾類:脂肪族氨基酸(Ala,Gly,Val,Leu,Ile,),芳香族氨基酸(Phe,Tyr,Trp,His),酰胺或羧基側(cè)鏈氨基酸(Asp,Glu,Asn,Gln),堿性側(cè)鏈氨基酸(Lys,Arg),含硫氨基酸(Cys,Met),含醇氨基酸(Ser,Thr),亞氨型基酸(Pro)。多肽化學(xué)合成中氨基酸的保護非常關(guān)鍵,直接決定了合成能夠成功的關(guān)鍵。因為常見的20中氨基酸中有很多都是帶有活性側(cè)鏈的,需要進行保護,一般要求,這些保護基在合成過程中穩(wěn)定,無副反應(yīng),合成結(jié)束后可以*定量的脫除。合成中需要進行保護的氨基酸包括:Cys,Asp,Glu,His,Lys,Asn,Gln,Arg,Ser,Thr,Trp,Tyr。需要進行保護的基團:羥基,羧基,巰基,氨基,酰胺基,胍基,吲哚,咪唑等。其中Trp也可以不保護,因為吲哚性質(zhì)比較穩(wěn)定。當(dāng)然在特殊的情況下,有些氨基酸也可以不保護,象,Asn,Gln ,Thr,Tyr。
多肽縮合試劑 
目前多肽合成中,主要采用羧基活化方法來完成接肽反應(yīng),zui早使用的是將氨基酸活化為酰氯,疊氮,對稱酸酐以及混合酸酐的方法,但是由于這些條件下,存在氨基酸消旋,以及反應(yīng)試劑危險以及制備比較復(fù)雜,逐漸被后來的縮合試劑取代,按照其結(jié)構(gòu)可以分為兩種:縮合試劑主要有:碳二亞胺型,鎓鹽型(Uronium)。 
液相多肽合成(solution phase synthesis) 
液相多肽合成現(xiàn)在仍然廣泛的使用,在合成短肽和多肽片段上具有合成規(guī)模大,合成成本低的顯著優(yōu)點,而且由于是在均相中進行反應(yīng),可以選擇的反應(yīng)條件更加豐富,象一些催化氫化,堿性水解等條件,都可以使用,這在固相中,使用卻由于反應(yīng)效率低,以及副反應(yīng)等原因,無法應(yīng)用。液相多肽合成中主要采用BOC和Z兩種反應(yīng)策略。 
合成多肽分析鑒定方法 
多肽的分析鑒定方法有多肽一級結(jié)構(gòu),二級結(jié)構(gòu)鑒定,多肽一級結(jié)構(gòu)包括:質(zhì)譜分析,氨基酸組成分析,氨基酸序列分析。二級結(jié)構(gòu)包括:圓二色譜(CD),NMR,X-衍射等方法。 
純度分析 
多肽的純度分析,一般都采用HPLC進行分析,選擇RP-C18,粒徑5μm,孔徑300A,4.6×150mm,流動相:A,0.1% TFA/H2O;B,0.1% TFA/ACN,洗脫梯度,5%B--65%B,時間30min。也有些多肽,特別是短肽,由于親水性強,在C18上保留很弱,需要改變條件,這里主要有兩種方法:一個改變分析梯度,可以將起始梯度改為2%,等度或小梯度洗脫;另外一個方法是在流動相中加入強離子對試劑,如七氟丁酸,十八烷基磺酸鈉等。 
 

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