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關(guān)鍵詞:免疫組化服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡(jiǎn)介:世界*品牌免疫組化服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
免疫組化服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
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產(chǎn)品品牌:
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程:
免疫組織化學(xué)技術(shù)按照標(biāo)記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。
一 免疫組化(LP 法)操作步驟
1. 切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復(fù),可在此步后進(jìn)行
⒉ 緩沖液洗 3min/2 次。
⒊ 為了降低內(nèi)源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色,將切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分鐘。
⒋ 緩沖液洗 5min/2 次。
⒌ 滴加 Ultra V Block , 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。
(注:孵育不要超過 10 分鐘,否則會(huì)導(dǎo)致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 - 10% 正常羊血清,這一步可以省略。)
⒍ 緩沖液洗 5min/2 次。
⒎ 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小時(shí)。(具體孵育時(shí)間和溫度由試驗(yàn)者zui終決定)
⒏ 緩沖液洗 5min/2 次。
9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer(增強(qiáng)子),在室溫下孵育 20 分鐘。
10 .緩沖液洗 5min/2 次。
11 .滴加 HRP Polymer(酶標(biāo)二抗) ,在室溫下孵育 30 分鐘。
(注:HRP Polymer 對(duì)光敏感,應(yīng)避免不必要的光暴露并儲(chǔ)存在不透明的小瓶中。)
12 .緩沖液洗 5min/2 次。
13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen),混勻后滴加到切片上,孵育 3 - 15 分鐘。(具體時(shí)間由染色深淺決定。)
14 .自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明,封片。
免疫組化SP法步驟:
1.烤片,68℃,20分鐘,
2. 常規(guī)二甲苯脫蠟,梯度酒精脫水;二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I(xiàn) 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min
3.阻斷 滅活內(nèi)源性過氧化物酶:3%H2O2 37℃孵育10min,PBS沖洗3X5min;
4. 抗原修復(fù):置0.01M枸櫞酸緩沖液(PH 6.0)中用煮沸(95℃,15-20min),自然冷卻20min 以上,再用冷水沖洗缸子,加快冷卻至室溫,PBS沖洗3X5min。
5. 正常羊血清工作液封閉,37℃10 min,傾去勿洗.
6. 滴加一抗4℃ 冰箱孵育,PBS沖洗3X5min(用PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照);
滴加生物素標(biāo)記二抗, 37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;
7. 滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液,37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;
8. DAB/ H2O2反應(yīng)染色,自來水充分沖洗后,
蘇木素復(fù)染,常規(guī)脫水,透明,干燥,封片。
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