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關(guān)鍵詞:內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介:世界*品牌內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果。
產(chǎn)品品牌:
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>1.干粉培養(yǎng)基原倍液的配制
1)配制過濾除菌的細(xì)胞培養(yǎng)基
①閱讀培養(yǎng)基使用說明,確定需要添加何種添加劑(如NaHCO3、L-谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等)。
②根據(jù)所需將培養(yǎng)基全部倒入一容器中,用少量注射用水(20℃~30℃)將袋內(nèi)殘留培養(yǎng)基洗下整理并入容器。加注射用水至總體積的95%,輕微攪拌溶解。
③加入規(guī)定量的碳酸氫鈉及所要添加的物質(zhì)。
④輕微攪拌溶解,加注射用水至規(guī)定體積。
⑤用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。
⑥用0.22μm濾膜正壓過濾除菌。
⑦溶液應(yīng)在2℃~8℃下避光保存。
2.配制可高壓滅菌細(xì)胞培養(yǎng)基
①根據(jù)所需將培養(yǎng)基全部倒入一容器中,用少量注射用水(20℃~30℃)將袋內(nèi)殘留培養(yǎng)基洗下,并入容器。加注射用水至總體積的95%,輕微攪拌溶解。
②在121℃、15psi下滅菌15分鐘。
③待溶液冷卻至室溫,加入無菌0.2mol/LL-谷氨酰胺溶液規(guī)定體積、無菌7.5%(w/v)碳酸氫鈉溶液規(guī)定體積,加注射用水(20℃~30℃)至規(guī)定體積,混勻。
④如果必要,用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。
⑤溶液應(yīng)在2℃~8℃下避光保存。
內(nèi)皮細(xì)胞易于從大血管分離培養(yǎng)成單層細(xì)胞,對于研究內(nèi)皮細(xì)胞再生、腫瘤促血管生長因子(TAF)等有很大價值。
研究人內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)以人臍帶靜脈灌流消化法zui為簡便,其法如下:
1、產(chǎn)后新鮮臍帶,無菌剪取10—15厘米長一段,如不能立即培養(yǎng),可于12小時內(nèi)保存于4℃。
2、用三通注射器吸取溫PBS液注入臍靜脈中洗去殘血,在入口處用線繩扎緊,以防液體返流。
3、用血管鉗夾緊臍帶一端,從另一端向臍靜脈中徐徐注入終濃度為0.1%的粗制膠原酶,充滿血管,消化3—10分鐘;注入口用線繩扎,以防液體返流。
4、吸出含有內(nèi)皮細(xì)胞的消化液,于離心管中,注入溫PBS輕輕反復(fù)沖洗后,一并注入離心管中(此步驟可重復(fù))。5、離心去上清,加入RPMI1640培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液,接種入培養(yǎng)器皿中,置溫箱培養(yǎng)。兩至三天可見細(xì)胞長成單層。
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