水產(chǎn)品中孔雀石綠檢測(cè)的固相萃取方法

（SuperClean AL-A）

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/h2>

本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC 法作為分析方法，檢測(cè)水產(chǎn)品中孔雀石綠含量。該方法可簡(jiǎn)化樣品的前處理過(guò)程，節(jié)省有機(jī)溶劑的使用，操作簡(jiǎn)便。

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物

孔雀石綠(CAS:569-64-2)

三、應(yīng)用范圍

本方法適用于水產(chǎn)品中孔雀石綠的檢測(cè)的 HPLC 檢測(cè)及確證。四、參考標(biāo)準(zhǔn)

《GB/T 19857-2005 水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的測(cè)定》五、實(shí)驗(yàn)材料

NuAnalytical SuperClean Alumina-A 固相萃取柱 1000 mg/3mL。六、實(shí)驗(yàn)方法

1、 樣品待測(cè)溶液制備

準(zhǔn)確稱(chēng)取魚(yú)肉樣品 5.0 g 于 50 mL 離心管 1 中，加入 1.5 mL 20%的鹽酸羥胺，2.5 mL 1.0

mol/L 的對(duì)甲苯磺酸溶液，5.0 mL 乙酸鈉-對(duì)甲苯磺酸緩沖液（4.95 g 無(wú)水乙酸鈉及 0.95 g  對(duì)

-甲苯磺酸于950ml水中，用乙酸調(diào)pH 至 4.5，用水定容至1 L），勻漿機(jī)均質(zhì)30 （s  10000 r/min）。

加入 10 mL 乙腈，劇烈振搖 30 s。加入 5 g 酸性氧化鋁，震蕩 30 s。離心機(jī)離心 10 min（3000

r/min）,取上清液轉(zhuǎn)移至預(yù)先加好 10 mL 水、2 mL 二甘醇的離心管 2 中。加入 10 mL 乙腈至離心管 1 中，重復(fù)上述提取一次，合并乙腈層。

離心管 2 中加入 15 mL 二氯甲烷，振蕩 10 s，離心 10 min（3000 r/min），取二氯甲烷層于梨形瓶中。繼續(xù)用 5 mL 乙腈、10 mL 二氯甲烷重復(fù)上述提取一次，合并兩次提取的二氯甲烷層。將提取液 45  ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至 1 mL，再用 2.5 mL 乙腈溶解，待凈化。

2、活化

依次用 5  mL 乙腈活化

3、上樣和洗脫

將梨形瓶中的待凈化液轉(zhuǎn)移至柱中凈化，梨形瓶使用 2.5 mL×2 的乙腈洗滌瓶?jī)纱?，把洗滌液依次通過(guò)柱子，整個(gè)上樣過(guò)程保持流速不超過(guò) 0.6 mL/min，收集全部流出液。

4、重新溶解

流出液 45  ℃氮吹至近干，用 1 mL 乙腈定容，過(guò) 0.45 μm 濾膜。

5、HPLC 條件

色譜柱：SuperLu C18 (250×4.6 mm,    5μm)

檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器，λ=618 nm

流動(dòng)相：A-乙腈    B-0.05 mol/L 乙酸銨緩沖溶液流速：1.2 mL/min           進(jìn)樣體積:50 μL

洗脫方式：梯度洗脫，梯度洗脫條件如下：

七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1、0.1 mg/kg 魚(yú)肉中孔雀石綠的添加回收結(jié)果

表 1    0.1mg/kg 魚(yú)肉中孔雀石綠的添加回收結(jié)果

回收率（%）

2、添加水平為 0.1 mg/kg 魚(yú)肉中孔雀石綠檢測(cè)的液相色譜圖

圖 1    添加水平為 0.1 mg/kg 魚(yú)肉中孔雀石綠檢測(cè)的液相色譜圖