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免疫組化實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題分析

閱讀:868      發(fā)布時(shí)間:2024-3-27
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1. IHC實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯色過(guò)深
一抗?jié)舛冗^(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)——降低一抗?jié)舛然驕p少孵育時(shí)間
孵育溫度過(guò)高——選擇4℃或室溫孵育

2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在非特異性顯色
石蠟切片脫蠟——延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間
蛋白封閉不充分——增加蛋白封閉時(shí)間
組織富含內(nèi)源性生物素與過(guò)氧化物酶——使用相關(guān)試劑進(jìn)行封閉

3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯色弱或無(wú)染色
一抗?jié)舛冗^(guò)低或孵育時(shí)間過(guò)短——增加一抗?jié)舛然蜓娱L(zhǎng)孵育時(shí)間
組織中無(wú)目的抗原的表達(dá)
一抗種屬來(lái)源與二抗不匹配

注意事項(xiàng)
切片脫蠟和水化要充分,加反應(yīng)液時(shí)要覆蓋組織充分;每次加液前甩干洗滌液,同時(shí)防止干片。
一抗的沖洗原則:?jiǎn)为?dú)沖洗,防交叉反應(yīng)污染;溫柔沖洗,防止切片脫落;推薦浸洗方式。
有條件的話最好立即拍照,若不能及時(shí)拍照,也要封好片和用指甲油封固,保持避光和濕度。


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