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技術(shù)文章

NIGHTSEA產(chǎn)品應(yīng)用二:預(yù)篩選樣本,輔助解剖

點擊次數(shù):3700 發(fā)布時間:2014-10-27

美國nightsea致力于研究和開發(fā)熒光觀測裝備,其產(chǎn)品系列有DFP-1雙熒光蛋白手電筒系列,BLS2單熒光蛋白手電筒系列SFA-RB體視顯微鏡熒光適配器。

熒光是各種各樣細胞生物學(xué)、神經(jīng)系統(tǒng)學(xué)及其他領(lǐng)域研究中的一種強大和廣泛使用的工具。
nightsea的DFP-1,BLS2和SFA-RB除了可用于篩選轉(zhuǎn)基因生物外,還可以用于樣本的預(yù)篩選、輔助解剖、用于珊瑚研究等,下面就列舉一些實例:

 

1. 有時候,研究者們需要對小鼠的伏隔核進行穿孔,以便進一步生化分析。如果能觀測到共轉(zhuǎn)染的熒光,就能很容易找到正確的穿孔部位。研究者們就是用BLS2 Bluestar手電筒,來觀測熒光,從而找到正確穿孔位置的(文獻– Xuan Li and Marina E. Wolf, 2011. Visualization of virus-infected brain regions using a GFP-illuminating flashlight enables accurate and rapid dissection for biochemical analysis. J. of Neuroscience Methods, Vol. 201, Issue 1, pp. 177-179. LINK)

EGFP標(biāo)記的慢病毒質(zhì)粒注射進小鼠大腦區(qū)域( Marina Wolf, Rosalind Franklin University

 

2.研究者從小鼠大腦中提取GFP標(biāo)記的背紋體。他們把這比喻成:從一個大一點的燕麥片中分離出一塊小的燕麥片,這是很困難的。但是他們用NIGHTSEA的DFP-1或BLS2(手電筒和眼鏡組合),他們很容易看到大腦中的目標(biāo)區(qū)域,從而讓解剖更準(zhǔn)確。

小鼠大腦中GFP標(biāo)記的背紋體(Charles Mazel. Sample photographed at laboratory of Stefano Vicini, Georgetown University

 

3.DFP-1雙熒光蛋白手電筒,BLS2單熒光蛋白手電筒,或SFA-RB體視顯微鏡熒光適配器,可以很快的檢測樣本是否染色(Alexa Fluor 488 Phalloidin標(biāo)記)成功,如下圖:

兔腰肌的肌纖維(用Alexa Fluor 488 Phalloidin標(biāo)記)

左圖:白光觀測  右圖:Royal Blue熒光觀測(Motic SMZ-186體視顯微鏡觀測)

 

4.SFA-RB體視顯微鏡熒光適配器以斑馬魚為模型,觀測不同毒劑(醫(yī)藥、農(nóng)藥、食品添加劑等)改變大腦的發(fā)育。觀測圖片如下:

基因斑馬魚大腦共聚焦圖像
Kaede protein– 綠色是未改變的,紅色是改變了的
Robert Thorn(Creton Lab, 布朗大學(xué))提供

 

5. 熒光是珊瑚采集研究的重要工具?,F(xiàn)在,可以用經(jīng)濟又實惠的SFA-RB體視顯微鏡熒光適配器安裝到體視顯微鏡檢測珊瑚。
下面的圖片是通過立體顯微鏡觀看珊瑚蟲。這是由Alina Szmant 博士(UNCW威爾明頓納大學(xué))與NIGHTSEA的Charles Mazel共同觀測的結(jié)果

 

6.用于結(jié)核分枝桿菌重組株的篩選

在結(jié)核分枝桿菌中成功構(gòu)建了同源重組系統(tǒng),利用該系統(tǒng)構(gòu)建了rv1364c、pstP跨膜區(qū)、pstP胞外區(qū)三個突變株,得到雙交換突變株的效率為25% -62.5%,從雙交換突變株得到無痕缺失突變株的效率為100%.通過gfp作為熒光標(biāo)記基因,利用NightSea BlueStar藍光手電筒和濾光眼鏡,可以對平板上的基因缺失株直接進行快速判定.
本研究采用nightsea BLS2 BlueStar 藍色手電筒和濾光鏡對平板上的結(jié)核分枝桿菌綠色熒光蛋白菌落進行快速鑒定。該方法可以從幾百個菌落中瞬間鎖定陽性克隆。平板上的菌落照片拍攝用單反相機加載濾光片(購自nightsea公司)實現(xiàn)。

摘自文章[結(jié)核分枝桿菌同源重組基因敲除系統(tǒng)的構(gòu)建和應(yīng)用]

 

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