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NIGHTSEA產(chǎn)品應(yīng)用二：預(yù)篩選樣本，輔助解剖
點(diǎn)擊次數(shù)：3605 發(fā)布時(shí)間：2014-10-27
美國(guó)nightsea致力于研究和開(kāi)發(fā)熒光觀測(cè)裝備，其產(chǎn)品系列有DFP-1雙熒光蛋白手電筒系列，BLS2單熒光蛋白手電筒系列，SFA-RB體視顯微鏡熒光適配器。
熒光是各種各樣細(xì)胞生物學(xué)、神經(jīng)系統(tǒng)學(xué)及其他領(lǐng)域研究中的一種強(qiáng)大和廣泛使用的工具。
nightsea的DFP-1,BLS2和SFA-RB除了可用于篩選轉(zhuǎn)基因生物外，還可以用于樣本的預(yù)篩選、輔助解剖、用于珊瑚研究等，下面就列舉一些實(shí)例：
1. 有時(shí)候，研究者們需要對(duì)小鼠的伏隔核進(jìn)行穿孔，以便進(jìn)一步生化分析。如果能觀測(cè)到共轉(zhuǎn)染的熒光，就能很容易找到正確的穿孔部位。研究者們就是用BLS2 Bluestar手電筒，來(lái)觀測(cè)熒光，從而找到正確穿孔位置的(文獻(xiàn)– Xuan Li and Marina E. Wolf, 2011. Visualization of virus-infected brain regions using a GFP-illuminating flashlight enables accurate and rapid dissection for biochemical analysis. J. of Neuroscience Methods, Vol. 201, Issue 1, pp. 177-179. LINK)
EGFP標(biāo)記的慢病毒質(zhì)粒注射進(jìn)小鼠大腦區(qū)域（ Marina Wolf, Rosalind Franklin University）
2.研究者從小鼠大腦中提取GFP標(biāo)記的背紋體。他們把這比喻成：從一個(gè)大一點(diǎn)的燕麥片中分離出一塊小的燕麥片，這是很困難的。但是他們用NIGHTSEA的DFP-1或BLS2（手電筒和眼鏡組合），他們很容易看到大腦中的目標(biāo)區(qū)域，從而讓解剖更準(zhǔn)確。
小鼠大腦中GFP標(biāo)記的背紋體（Charles Mazel. Sample photographed at laboratory of Stefano Vicini, Georgetown University）
3.用DFP-1雙熒光蛋白手電筒，BLS2單熒光蛋白手電筒，或SFA-RB體視顯微鏡熒光適配器，可以很快的檢測(cè)樣本是否染色（Alexa Fluor 488 Phalloidin標(biāo)記）成功，如下圖：
兔腰肌的肌纖維（用Alexa Fluor 488 Phalloidin標(biāo)記）
左圖：白光觀測(cè) 右圖：Royal Blue熒光觀測(cè)（Motic SMZ-186體視顯微鏡觀測(cè)）
4.用SFA-RB體視顯微鏡熒光適配器以斑馬魚(yú)為模型，觀測(cè)不同毒劑（醫(yī)藥、農(nóng)藥、食品添加劑等）改變大腦的發(fā)育。觀測(cè)圖片如下：
基因斑馬魚(yú)大腦共聚焦圖像
Kaede protein– 綠色是未改變的，紅色是改變了的
Robert Thorn（Creton Lab, 布朗大學(xué)）提供
5. 熒光是珊瑚采集研究的重要工具?，F(xiàn)在，可以用經(jīng)濟(jì)又實(shí)惠的SFA-RB體視顯微鏡熒光適配器安裝到體視顯微鏡檢測(cè)珊瑚。
下面的圖片是通過(guò)立體顯微鏡觀看珊瑚蟲(chóng)。這是由Alina Szmant 博士(UNCW威爾明頓納大學(xué))與NIGHTSEA的Charles Mazel共同觀測(cè)的結(jié)果
6.用于結(jié)核分枝桿菌重組株的篩選
在結(jié)核分枝桿菌中成功構(gòu)建了同源重組系統(tǒng),利用該系統(tǒng)構(gòu)建了rv1364c、pstP跨膜區(qū)、pstP胞外區(qū)三個(gè)突變株,得到雙交換突變株的效率為25％ -62.5％,從雙交換突變株得到無(wú)痕缺失突變株的效率為100％.通過(guò)gfp作為熒光標(biāo)記基因,利用NightSea BlueStar藍(lán)光手電筒和濾光眼鏡,可以對(duì)平板上的基因缺失株直接進(jìn)行快速判定.
本研究采用nightsea BLS2 BlueStar 藍(lán)色手電筒和濾光鏡對(duì)平板上的結(jié)核分枝桿菌綠色熒光蛋白菌落進(jìn)行快速鑒定。該方法可以從幾百個(gè)菌落中瞬間鎖定陽(yáng)性克隆。平板上的菌落照片拍攝用單反相機(jī)加載濾光片（購(gòu)自nightsea公司）實(shí)現(xiàn)。
摘自文章[結(jié)核分枝桿菌同源重組基因敲除系統(tǒng)的構(gòu)建和應(yīng)用]