乳酸含量（lactic acid ，LA ）試劑盒說明書

乳酸含量（lactic acid ，LA ）試劑盒說明書可見分光光度法

                                               規(guī)格：50管/24樣

注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義

乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產(chǎn)物，與糖代謝、脂類代謝、蛋白質(zhì)代謝及細(xì)胞內(nèi)能量代謝密切相關(guān)，乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標(biāo)。

測定原理

乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸，同時使NAD⁺還原生成NADH和H⁺，H⁺傳遞給PMS生成的PMSH₂還原INT生成紅色物質(zhì)，在530nm處有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器

天平、研缽、離心機(jī)、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制

提取液：液體 55mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 8mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 12mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1 支，-20℃避光保存。臨用前加入1.2mL蒸餾水充分溶解。

試劑四：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加12mL蒸餾水充分溶解。

試劑五：粉劑×1 支，4℃避光保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 支，4℃保存。

顯色液：臨用前根據(jù)用量按照提取液（V）：試劑三（V）：試劑四（V）：試劑五（m）=1：

0.3：3：15（mg）的比例充分混勻。

樣本處理

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，12000g離心10min，取上清測定。

2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；于 4℃，12000g 離心10min，取上清測定。

3. 血清：直接測定。

測定操作

測定操作

注意：空白管、標(biāo)準(zhǔn)對照管和標(biāo)準(zhǔn)測定管只需測定一次

計算公式

1. 按照蛋白含量計算

LA 含量（μmol/mg prot）=△A 樣÷△A 標(biāo)×C 標(biāo)÷ Cpr

=2×△A 樣÷△A 標(biāo)÷ Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計算

LA 含量（μmol/g）=△A 樣÷△A 標(biāo)×C 標(biāo)÷ W

=2×△A 樣÷△A 標(biāo)÷ W

3. 按照細(xì)胞數(shù)量計算

LA 含量（μmol/10⁴cell）=△A 樣÷△A 標(biāo)×C 標(biāo)÷ 細(xì)胞數(shù)量

=2×△A 樣÷△A 標(biāo)÷ 細(xì)胞數(shù)量

4. 按照液體體積計算

LA 含量（μmol/mL）=△A 樣÷△A 標(biāo)×C 標(biāo)

=2×△A 樣÷△A 標(biāo)

C 標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，2mmol/L ；W：樣本質(zhì)量，g/mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL

注意事項

1. 空白管、標(biāo)準(zhǔn)對照管、標(biāo)準(zhǔn)測定管只需做一次。

2. 若吸光值超過 1.2，請進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尯笤龠M(jìn)行測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

3. 低檢出限為 1.8μmol/L。數(shù)，500 萬。