微量法

注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義

木質(zhì)素是構(gòu)成植物細(xì)胞壁的成分之一，是由聚合的芳香醇構(gòu)成的一類物質(zhì)，存在于木質(zhì)組織中，主要作用是通過(guò)形成交織網(wǎng)來(lái)硬化細(xì)胞壁。木質(zhì)素主要位于纖維素纖維之間，起抗壓作用。

測(cè)定原理

木質(zhì)素中的酚羥基發(fā)生乙酰化后在 280nm 處有特征吸收峰，280nm 的吸光值高低與木質(zhì)素含量正相關(guān)。

需自備的儀器和用品

天平、40 目篩，玻璃試管、燒杯、離心機(jī)，恒溫水浴鍋、烘箱、封口膜、紫外分光光度計(jì)、1mL 石英比色皿、高氯酸。

試劑組成和配制

試劑一：液體 50mL×2 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 100mL×2 瓶，4℃保存。

樣品處理

樣品 80℃烘干至恒重，粉碎，過(guò) 40 目篩，稱取約 5mg（記為 W）于 10mL 玻璃試管中（務(wù)*玻璃試管，不可用 Ep 管）

測(cè)定操作表

計(jì)算公式

用微量石英比色皿計(jì)算公式如下：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.02776x+0.0068，R² =0.9889

Lignin（mg/g 干重）= (ΔA-0.0068)÷0.02776×V 反總×10 ^-3 ÷W×T

=0.0735×(ΔA-0.0068) ÷W×T

V 反總：反應(yīng)總體積：2.04mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：稀釋倍數(shù)

用 96 孔板計(jì)算公式如下：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.01388x+0.0034，R² =0.9889

Lignin（mg/g 干重）= (ΔA-0.0034)÷0.01388×V 反總×10 ^-3 ÷W×T

=0.1470×(ΔA-0.0034) ÷W×T

V 反總：反應(yīng)總體積：2.04mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：稀釋倍數(shù)

注意事項(xiàng)

1. 試劑一有毒性，請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施，加熱前必須用封口膜密封，以防氣體溢出。

2. 加熱過(guò)程中有劇烈反應(yīng)，震蕩時(shí)輕搖，以免壓力過(guò)大噴出造成人身傷害。

3. 試劑三具有強(qiáng)刺激性，建議操作過(guò)程全部在通風(fēng)櫥子操作。

4. 取上清加試劑三步驟根據(jù)自己樣品乙?；潭龋噭┤挠昧靠烧{(diào)整，保證吸光值在0.1-0.8之間即可，并在公式中參與計(jì)算。

5.乙?；?/span>測(cè)定木質(zhì)素含量如受到實(shí)驗(yàn)環(huán)境的影響，可自行制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。