EDTA 脫鈣液說明書

產品簡介：

在組織切片過程中，一些組織內含有骨質或鈣化灶時，含鈣的組織不宜直接用石蠟包埋

切片。這是因為鈣和石蠟之間的密度不同，較難切出完整的切片。對含鈣組織固定之后，

再進行脫鈣或二者同時進行。然后進行下游操作如脫水、透明、浸蠟、包埋、切片。用于脫

鈣的試劑很多，脫鈣劑包括有機酸、無機酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及電解法脫鈣。EDTA

是一種相對較好的螯合脫鈣劑，對組織結構影響小，可以較好的保存組織的某些酶類，經

EDTA 脫鈣后的組織可以進行免疫組化和原位雜交染色，但是該法脫鈣速度太慢，一般脫需

要數(shù)周至數(shù)月。

EDTA脫鈣液主要由EDTA、磷酸鹽等組成，pH 值為 7.2。其優(yōu)點是：①經

EDTA 脫鈣的組織染色結果好；②對組織的結構損害小。其缺點是：①脫鈣速度很慢，不適

合常規(guī)標本脫鈣使用；②脫鈣后組織會稍微變硬；③不宜用化學方法確定脫鈣終點。

自備材料：

1、 PBS

2、 蒸餾水

3、 加熱裝置或微波爐

EDTA 脫鈣液操作步驟(僅供參考)：

1、骨組織脫鈣時，取材不易過厚，一般大約 5mm。

2、組織固定后，用 PBS 清洗 3 次，每次 20min。

3、組織用蒸餾水洗清洗 3 次，每次 20min。

4、 組織轉移至 20~30 倍體積的 EDTA 脫鈣液中，脫鈣 10～30 天或更長時間。如果想加

快脫鈣速度，可以置于 37℃進行脫鈣。如果必要，更換新的 EDTA 脫鈣液繼續(xù)脫鈣，

多數(shù)組織脫鈣 2 周～3 個月即可，每周更換一次直至終點。亦可采用微波快速脫鈣法：

微波爐設在 200W 左右的檔位，每次加熱 5min，依據(jù)組織厚度和密度重復 3～5min，

中間間隔 3～5min。

5、用蒸餾水沖洗數(shù)次。

6、常規(guī)脫水、包埋。

 注意事項：

1、 厚度 5mm 的骨組織塊脫鈣時間一般脫鈣 10~30 天即可，大多數(shù)在 14～60 天即可。

2、 適當加溫能加快脫鈣的速度，一般不應超過 37～40℃，溫度過高容易使骨組織造成松

散解體，尤其不可大于 60℃。

3、 脫鈣應*，防止脫鈣不足或過度。脫鈣程度應控制在不影響組織切片的同時盡量縮短

脫鈣時間，以免脫鈣過長引起組織損害。

4、 脫鈣用具避免使用金屬容器，盡量使用玻璃容器。

5、 骨組織脫鈣應先固定后脫鈣或脫鈣固定同時進行，不應先脫鈣后固定，以便減少組織的

損傷程度。

6、 每隔一段時間檢測一次脫鈣程度，脫鈣過度會增加組織的損傷程度，影響染色結果。

7、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期： 12 個月有效。

附錄：

脫鈣終點的測定(物理法)：采用針刺、手掐、鉗夾等方法，當骨組織變軟或針刺時沒有阻力

感即可終止脫鈣。物理檢測法會對組織結構有一定的損害， 盡量避免用力過大或反復檢測。