產(chǎn)品特點(diǎn)：

簡(jiǎn)單快速：1 h內(nèi)即可獲得超純的基因組DNA。

廣 泛：適用于血液、多種動(dòng)物細(xì)胞和動(dòng)物組織等。

超 純：獲得的DNA純度高，可直接用于PCR、酶切、雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng) 請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。

1. 使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說(shuō)明先在緩沖液GD和漂洗液PW中加入無(wú)水乙醇。

2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA段較小且提取量也下降。

3. 若緩沖液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，搖勻后使用。

4. 所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)，室溫下離心。

 操作步驟

使用前請(qǐng)先在緩沖液GD和漂洗液PW中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。

1. 處理材料

a. 如提取材料為血液，可直接使用200 μl新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，不足200 μl

可加緩沖液GA補(bǔ)足；

注意：如需處理更大體積血液，如300 μl-1 ml，應(yīng)按以下步驟操作：在樣品中加入3倍體積紅細(xì)胞裂解液 （例如，300 μl血液加入900 μl紅細(xì)胞裂解液），顛倒混勻， 室溫放置5 min，期間再顛倒混勻幾次。10000 rpm(~11,500×g)離心1 min（若離心機(jī)高轉(zhuǎn)速不允許，可3000 rpm(~3,400×g)離心5 min），吸去上清，留下白細(xì)胞沉淀，加200 μl緩沖液GA，振蕩至*混勻。

紅細(xì)胞裂解液本公司另外有售（目錄號(hào)：RT122），可根據(jù)需要來(lái)決定購(gòu)買(mǎi)。

b. 如果處理血樣為禽類(lèi)、鳥(niǎo)類(lèi)、兩棲類(lèi)或更低級(jí)生物的抗凝血液，其紅細(xì)胞為有核細(xì)胞，因此處理量5-20 μl，可加緩沖液GA補(bǔ)足200 μl后進(jìn)行下面的裂解步驟。

c. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)先處理為細(xì)胞懸液，然后10,000 rpm(~11,200×g)離心1 min，倒盡上清，加200 μl緩沖液GA，振蕩至*懸??；

d. 動(dòng)物組織（脾組織用量應(yīng)少10 mg）應(yīng)先打碎處理為細(xì)胞懸液，然后10,000 rpm(~11,200×g)離心1 min，倒盡上清，加200 μl緩沖液GA，振蕩至*懸浮。

注意：如果需要去除RNA，可加入4 μl RNaseA（100 mg/ml）溶液（客戶(hù)自備，目錄號(hào)：RT405-12），振蕩15 sec，室溫放置5 min。

2. 加入20 μl Proteinase K溶液，混勻。

a. 提取血液基因組時(shí)，只需加入Proteinase K混勻，即可繼續(xù)進(jìn)行下一步。

b. 提取細(xì)胞基因組時(shí)，只需加入Proteinase K混勻，即可繼續(xù)進(jìn)行下一步。

c. 提取組織基因組時(shí)，加入Proteinase K混勻后，在56℃放置，直至組織溶解，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠，再進(jìn)行下一步驟。

注意：不同組織裂解時(shí)間不同，通常需1-3 h即可完成（鼠尾需要消化過(guò)夜）。不會(huì)影響后續(xù)操作。每小時(shí)顛倒混合樣品2-3次，用水浴振蕩器也可。

3.加入200 μl緩沖液GB，充分顛倒混勻，70℃放置10 min，溶液應(yīng)變清亮，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。

注意：加入緩沖液GB時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，一般70℃放置時(shí)會(huì)消失，不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說(shuō)明細(xì)胞裂解不*，可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取出的DNA不純。當(dāng)血液體積≤200 μl且沒(méi)有采用紅細(xì)胞裂解處理，或是樣本儲(chǔ)存條件不佳，水浴后顏色可能為深褐色，注意溶液中沒(méi)有團(tuán)塊等沉淀。

4.加人200 μl 無(wú)水乙醇，充分振蕩混勻15 sec，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。

5.將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個(gè)吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中）， 12,000 rpm (~13,400×g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放回收集管中。

6.向吸附柱CB3中加入500 μl緩沖液GD （使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。

7.向吸附柱CB3中加入600 μl 漂洗液PW（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇）， 12,000 rpm (~13,400×g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。

8.. 重復(fù)操作步驟7。

9.將吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min，倒掉廢液。將吸附柱CB3置于室溫放置數(shù)分鐘，以*晾干吸附材料中殘余的漂洗液。

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實(shí)驗(yàn)。

10.將吸附柱CB3轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-200 μl洗脫緩沖液TE，室溫放置2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)離心 2 min，將溶液收集到離心管中。

注意：洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50 μl，體積過(guò)小影響回收效率。洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用ddH₂O做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。為增加基因組DNA 的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室溫放置2 min，12,000 rpm (~13,400×g )離心2 min。