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組蛋白脫乙?;?(HDAC1)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

時(shí)間:2021/12/27閱讀:1626
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主要用途

     組蛋白脫乙?;?/span>1HDAC1)活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過比色探針對(duì)硝基苯胺標(biāo)記乙酰化多肽底物,在特異性抑制劑的存在下,經(jīng)過HDAC1脫乙酰基后,被位點(diǎn)特異性氨基肽酶水解,釋放黃色對(duì)硝基苯胺即采用比色法來(lái)測(cè)定樣品中酶活性經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞、組織裂解萃取液樣品(動(dòng)物、人體)、核蛋白樣品、部分或*純化酶樣品中HDAC1的特異活性定量檢測(cè),以及抑制劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。

保存方式

保存在-20冰箱里,底物液(Reagent B)避免光照,有效保證6

用戶自備

(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于細(xì)胞預(yù)處理

培養(yǎng)箱:用于反應(yīng)物孵育

96孔板或100微升1厘米光徑比色皿:用于反應(yīng)和比色的容器

酶標(biāo)儀或分光光度儀:用于比色分析

實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)開始前,將-20℃冰箱里的試劑置入冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作。

一、 測(cè)定準(zhǔn)備 

1. 準(zhǔn)備好待測(cè)樣品(例如核蛋白或純化酶樣品等),置于冰槽里

2. 設(shè)定好酶標(biāo)儀或分光光度儀(溫度為37℃): 波長(zhǎng)405nm,并置零

二、活性測(cè) 

1) 總活性測(cè)定

 

1. 96孔板上做好相應(yīng)標(biāo)記:背景空對(duì)照和待測(cè)樣品總活性

2. 分別移取xx微升緩沖液(Reagent A到相應(yīng)孔

3. 分別加入xx微升底物液(Reagent B

4. 分別加入xx微升補(bǔ)充液(Reagent E或待測(cè)樣品(50微克核蛋白或200微克細(xì)胞裂解萃取液總蛋白)(注意:樣品須清澈

5. 輕輕搖動(dòng)96孔板30

6. 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里,孵育60分鐘,避免光照

7. 分別加入xx微升終止液(Reagent C

8. 分別加入xx微升酶解液(Reagent D

9. 輕輕搖動(dòng)96孔板30

10. 37℃培養(yǎng)箱里,孵育30分鐘

11. 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀或轉(zhuǎn)移到100微升比色皿,在分光光度儀里檢測(cè):獲得吸光讀數(shù)

2) 非特異活性 

1. 96孔板上做好相應(yīng)標(biāo)記:待測(cè)樣品非特異活性

2. 移取xx微升緩沖液(Reagent A到相應(yīng)孔

3. 加入xx微升專性液(Reagent F

4. 加入20微升待測(cè)樣品(50微克核蛋白或200微克細(xì)胞裂解萃取液總蛋白)(注意:樣品須清澈

5. 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里,孵育10分鐘,避免光照

6. 加入xx微升底物液(Reagent B

7. 輕輕搖動(dòng)96孔板30

8. 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里,孵育60分鐘,避免光照

9. 加入xx微升終止液(Reagent C

10. 加入xx微升酶解液(Reagent D

11. 輕輕搖動(dòng)96孔板30

12. 37℃培養(yǎng)箱里,孵育30分鐘

13. 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀或轉(zhuǎn)移到100微升比色皿,在分光光度儀里檢測(cè):獲得吸光讀數(shù)

3) 樣品活性計(jì)算

(1) 酶標(biāo)儀檢測(cè)

(2) 比色皿檢測(cè)

  3)樣品特異活性 

注意事項(xiàng)

 

1. 本產(chǎn)品為20次操作,包括背景對(duì)照

2. 操作時(shí),須戴手套

3. 系統(tǒng)操作過程中,背景測(cè)定只需1

4. 樣品須澄清,至關(guān)重要

5. 樣品處理時(shí),避免使用蛋白酶抑制劑、PMSF、烷基胺(alkyl amine)等

6. 孵育反應(yīng)完成后即刻進(jìn)行比色測(cè)定

7. 濾波器可以使用波長(zhǎng)400nm替代405nm

8. 測(cè)定值由低到高變化;測(cè)定可以持續(xù)60分鐘

9. 測(cè)定值吸光讀數(shù)越高,表明酶活性越高

10. 比色測(cè)定后,比色皿須清洗*

11. 待測(cè)樣本為核蛋白樣品,其蛋白濃度為50微克/20微升;待測(cè)樣本為細(xì)胞裂解懸液,其蛋白濃度為200微克/20微升(本公司提供  Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒GMS30030.1

12. 如果待測(cè)樣品濃度過高或過低,可以調(diào)整樣品濃度

13. 組蛋白脫乙酰基酶1單位活性定義為:在37℃,pH 8.0條件下,每分鐘內(nèi)能夠釋放1微摩爾對(duì)硝基苯酚所需的酶量作為一個(gè)活性單位

14. 本公司提供系列組蛋白脫乙?;?/span>檢測(cè)試劑產(chǎn)品


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