組蛋白脫乙?；?（HDAC1）活性比色法定量檢測試劑盒說明書

主要用途

     組蛋白脫乙?；?/span>1（HDAC1）活性比色法定量檢測試劑是一種旨在通過比色探針對硝基苯胺標(biāo)記乙?；嚯牡孜?，在特異性抑制劑的存在下，經(jīng)過HDAC1脫乙?；?，被位點(diǎn)特異性氨基肽酶水解，釋放黃色對硝基苯胺，即采用比色法來測定樣品中酶活性的經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞、組織裂解萃取液樣品（動(dòng)物、人體）、核蛋白樣品、部分或*純化酶樣品中HDAC1的特異活性定量檢測，以及抑制劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定。

保存方式

保存在－20℃冰箱里，底物液（Reagent B）避免光照，有效保證6月

用戶自備

（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于細(xì)胞預(yù)處理

培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)物孵育

96孔板或100微升1厘米光徑比色皿：用于反應(yīng)和比色的容器

酶標(biāo)儀或分光光度儀：用于比色分析

實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)開始前，將－20℃冰箱里的試劑置入冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作。

一、 測定準(zhǔn)備 

1． 準(zhǔn)備好待測樣品（例如核蛋白或純化酶樣品等），置于冰槽里

2． 設(shè)定好酶標(biāo)儀或分光光度儀（溫度為37℃）： 波長405nm，并置零

二、活性測 

1） 總活性測定

1． 在96孔板上做好相應(yīng)標(biāo)記：背景空對照和待測樣品總活性

2． 分別移取xx微升緩沖液（Reagent A）到相應(yīng)孔里

3． 分別加入xx微升底物液（Reagent B）

4． 分別加入xx微升補(bǔ)充液（Reagent E）或待測樣品（50微克核蛋白或200微克細(xì)胞裂解萃取液總蛋白）（注意：樣品須清澈）

5． 輕輕搖動(dòng)96孔板30秒

6． 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里，孵育60分鐘，避免光照

7． 分別加入xx微升終止液（Reagent C）

8． 分別加入xx微升酶解液（Reagent D）

9． 輕輕搖動(dòng)96孔板30秒

10． 在37℃培養(yǎng)箱里，孵育30分鐘

11． 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀或轉(zhuǎn)移到100微升比色皿，在分光光度儀里檢測：獲得吸光讀數(shù)

2） 非特異活性 

1． 在96孔板上做好相應(yīng)標(biāo)記：待測樣品非特異活性

2． 移取xx微升緩沖液（Reagent A）到相應(yīng)孔里

3． 加入xx微升專性液（Reagent F）

4． 加入20微升待測樣品（50微克核蛋白或200微克細(xì)胞裂解萃取液總蛋白）（注意：樣品須清澈）

5． 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里，孵育10分鐘，避免光照

6． 加入xx微升底物液（Reagent B）

7． 輕輕搖動(dòng)96孔板30秒

8． 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里，孵育60分鐘，避免光照

9． 加入xx微升終止液（Reagent C）

10． 加入xx微升酶解液（Reagent D）

11． 輕輕搖動(dòng)96孔板30秒

12． 在37℃培養(yǎng)箱里，孵育30分鐘

13． 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀或轉(zhuǎn)移到100微升比色皿，在分光光度儀里檢測：獲得吸光讀數(shù)

3） 樣品活性計(jì)算

（1） 酶標(biāo)儀檢測

（2） 比色皿檢測

  （3）樣品特異活性 

注意事項(xiàng)

1． 本產(chǎn)品為20次操作，包括背景對照

2． 操作時(shí)，須戴手套

3． 系統(tǒng)操作過程中，背景測定只需1次

4． 樣品須澄清，至關(guān)重要

5． 樣品處理時(shí)，避免使用蛋白酶抑制劑、PMSF、烷基胺（alkyl amine）等

6． 孵育反應(yīng)完成后即刻進(jìn)行比色測定

7． 濾波器可以使用波長400nm替代405nm

8． 測定值由低到高變化；測定可以持續(xù)60分鐘

9． 測定值吸光讀數(shù)越高，表明酶活性越高

10． 比色測定后，比色皿須清洗*

11． 待測樣本為核蛋白樣品，其蛋白濃度為50微克/20微升；待測樣本為細(xì)胞裂解懸液，其蛋白濃度為200微克/20微升（本公司提供  Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒GMS30030.1）

12． 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品濃度

13． 組蛋白脫乙?；?/span>1單位活性定義為：在37℃，pH 8.0條件下，每分鐘內(nèi)能夠釋放1微摩爾對硝基苯酚所需的酶量作為一個(gè)活性單位

14． 本公司提供系列組蛋白脫乙?；?/span>檢測試劑產(chǎn)品