組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP） 活性測定試劑盒說明書

規(guī)格：50管/24樣

注意：正式測定之前選擇 2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：

AKP/ALP 是一種含鋅的糖蛋白酶，在堿性環(huán)境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。AKP/ALP 廣泛分布于人體各臟器中，以肝臟為主。

測定原理：

在堿性環(huán)境中，AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉生成游離酚；酚與 4-氨基安替比林和鐵氰化反應(yīng)紅色亞醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通過測定 510 nm 吸光度增加速率，來計(jì)算AKP 活性。

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1 瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體×1 瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體×1 瓶，4℃避光保存，未變成藍(lán)綠色之前均可使用。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 支（EP 管中），2 μ mol/mL 酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

粗酶液提?。?/span>

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，

加入 1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，4℃、8000g 離心 10min，取上清液待測。

2. 血液可直接測定，或者適當(dāng)稀釋后測定。

測定步驟：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到510nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30min。

3. 空白管：取EP管，加入20μL蒸餾水，200μL試劑二，200μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四600μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入20μL標(biāo)準(zhǔn)品，200μL試劑二，200μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四600μL，混勻后于510 nm 測定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

5. 對照管：取EP管，加入200μL試劑二，200μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四600μL，混勻；最后加入20μL上清液，混勻后于510 nm測定吸光度，記為A對照管。

6. 測定管：取EP管，加入20μL上清液，200μL試劑二，200μL試劑三，混勻后置于 37℃水浴中保溫15min；加入試劑四600μL，混勻后于510 nm 測定吸光度，記為A測定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

規(guī)格：50管/24樣

注意：正式測定之前選擇 2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：

AKP/ALP 是一種含鋅的糖蛋白酶，在堿性環(huán)境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。AKP/ALP 廣泛分布于人體各臟器中，以肝臟為主。

測定原理：

在堿性環(huán)境中，AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉生成游離酚；酚與 4-氨基安替比林和鐵氰化反應(yīng)紅色亞醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通過測定 510 nm 吸光度增加速率，來計(jì)算AKP 活性。

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1 瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體×1 瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體×1 瓶，4℃避光保存，未變成藍(lán)綠色之前均可使用。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 支（EP 管中），2 μ mol/mL 酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，

加入 1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，4℃、8000g 離心 10min，取上清液待測。

2. 血液可直接測定，或者適當(dāng)稀釋后測定。

測定步驟：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到510nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30min。

3. 空白管：取EP管，加入20μL蒸餾水，200μL試劑二，200μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四600μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入20μL標(biāo)準(zhǔn)品，200μL試劑二，200μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四600μL，混勻后于510 nm 測定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

5. 對照管：取EP管，加入200μL試劑二，200μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四600μL，混勻；最后加入20μL上清液，混勻后于510 nm測定吸光度，記為A對照管。

6. 測定管：取EP管，加入20μL上清液，200μL試劑二，200μL試劑三，混勻后置于 37℃水浴中保溫15min；加入試劑四600μL，混勻后于510 nm 測定吸光度，記為A測定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。