PEG1450溶液(50%,無菌)說明書

簡介：

PEG1450溶液(50%,無菌)主要由 PEG1450(CAS號25322-68-3)、磷酸鹽等組成，其作用原理使能夠改變各類細胞的膜結構，使兩細胞接觸點處質膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組，兩細胞接口處在雙分子層質膜的相互親和以及彼此的表面張力作用下，細胞發(fā)生融合。PEG1450溶液(50%,無菌)可用作融合劑，以獲得生產單克隆抗體的雜交瘤細胞，誘導細胞雜交，該試劑同Sigma P7181產品，經嚴格無菌處理。該試劑僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1、MEM 培養(yǎng)基、胎牛血清

2、CO2 培養(yǎng)箱、離心機

3、HAT、HT、A Media Supplement

4、胰蛋白酶消化液

操作步驟(僅供參考)：
1、如果變成膠凍狀，可 37~60℃水浴使其變成溶液。 

2、單層貼壁細胞：將雜交前體細胞以相同數量(5×104/ml)接種，以適當的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞，待細胞貼壁擴展至匯合成片(80%匯合率)的密度，吸干培養(yǎng)液，加入2ml PEG1450溶液(50%,無菌)，輕輕轉動1min 使PEG1450溶液覆蓋所有細胞，靜置1min，加入5mlMEM培養(yǎng)液以稀釋 PEG1450溶液，吸干凈稀釋的 PEG1450溶液，再用 5ml MEM 培養(yǎng)液洗滌被 PEG 處理的細胞，吸干凈洗液，加入5ml MEM 培養(yǎng)液，37℃，5%CO2 培養(yǎng)過夜；24~48h后先吸去培養(yǎng)液，加入胰酶消化液處理細胞，待細胞消化后吸除胰酶消化液，用 HAT 選擇培養(yǎng)剔除 HPRT和TK缺陷細胞；棄上清液，用補加1×HT 和 1×A的培養(yǎng)液重新懸浮細胞，融合12~24h 后進行異核體分析，雜交前體細胞在4~5天內發(fā)生死亡，對于大多數融合前體細胞而言，10~14天可見雜交細胞克隆。
3、懸浮細胞：將兩種不同親體的細胞各1ml(約為 1×107)混勻，800g 離心10min 以沉淀雜交前體細胞，棄上清液，使之剩余約1ml，手指輕彈管底或手搖離心管使兩種細胞混勻并重新懸浮，在離心管中加入1ml PEG1450 溶液(50%,無菌)，置于37℃水浴 2min，加入5ml提前 37℃預熱的含10%胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)液，使 PEG1450稀釋并停止作用，1000g 離心 5min，棄上清液，加入5mlMEM 培養(yǎng)液以稀釋 PEG1450溶液，吸干凈稀釋的 PEG1450 溶液。用 5ml無血清 MEM 培養(yǎng)液，手搖離心管重懸細胞(不要破壞細胞)，1000g離心5min， 棄上清液，重復 1 次該步驟，加入含有20%的胎牛血清的 HAT 選擇培養(yǎng)基，混勻，將細胞懸液用培養(yǎng)液稀釋至5×104/ml，接種于96孔板（每孔 0.1ml）或其他器皿中，37℃ 5%CO2 孵育過夜24~48h 后選出融合細胞。

注意事項：

1、應注意無菌操作，避免被微生物污染。

2、PEG1450溶液較為粘稠時，可37~60℃水浴使其變成溶液。

3、體外培養(yǎng)的單層貼壁細胞或懸浮細胞均可做融合，但成功概率較大的是單層貼壁細胞。

 有效期：6 個月有效。