果實(shí)中有機(jī)酸的測(cè)定-HPLC法

果實(shí)中有機(jī)酸的測(cè)定-HPLC法

    果實(shí)中的有機(jī)酸有草酸、乙酸、蘋果酸、檸檬酸、琥珀酸、乳酸等。乳癰常規(guī)的酸堿滴定法，雖然可測(cè)出總算量，但對(duì)各成分酸的含量則無法確定，若采用液相色譜法（HPLC）則可解決此難題。

     液相蘇測(cè)有機(jī)酸是利用有機(jī)酸在化學(xué)合C18固定相與2%NH4H2PO4的流動(dòng)相分配系數(shù)之間的差異而進(jìn)行分離后，再經(jīng)紫外檢測(cè)器或示差吸光檢測(cè)器而檢出，定性可根據(jù)色譜曲線的保留時(shí)間，定量可根據(jù)色譜峰面積或峰高，利用外標(biāo)法計(jì)算而得。

試劑和儀器 夜宵液相色譜儀，告訴離心機(jī)，0.45nm唯恐過濾膜，10ml進(jìn)樣器。NH4H2PO4496%乙醇，0.01mol/NaOH及200ppm標(biāo)準(zhǔn)有機(jī)酸.

試驗(yàn)步驟

1、樣品的處理 5-10g樣品用80%乙醇25ml于75℃水浴中提取15min，冷后離心，收集煽情也，沉淀10ml80%乙醇洗兩次，江上清液收集在一起，zui后用80%乙醇定容至50ml取5ml蒸發(fā)至干（在75℃下），殘?jiān)?ml流動(dòng)相溶解。共色譜測(cè)定用。

2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制  取200ppm的原液0.5、1、2、3、4ml，用流動(dòng)相稀釋至5ml混勻后共色譜測(cè)定用。

3、色譜測(cè)定

固定相：化學(xué)鍵合C18

流動(dòng)相：2.5%NH4H2PO6(PH=2.8)

流速：1ml/min

進(jìn)樣量10ul

檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器（214nm），0.1AUFS

以峰高或峰面積做標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找出有機(jī)酸濃度求算出有機(jī)酸含量。