細(xì)胞膜的流動(dòng)性或微粘度

細(xì)胞膜的流動(dòng)性或微粘度 

    膜的流動(dòng)性或者微粘度，可以通過(guò)測(cè)量結(jié)合到膜雙分子層中的疏水熒光探針的熒光偏振來(lái)研究。因?yàn)闊晒夥肿游掌窆獾膸茁屎桶l(fā)射熒光的偏振度與熒光分子相對(duì)于激發(fā)光偏振面的空間取向有關(guān)。

    若以線偏振光激發(fā)隨機(jī)取向的熒光分子，那么，與激發(fā)光偏振面取向一致的那些熒光分子具有zui大的吸收。由于多數(shù)熒光分子的激發(fā)太壽命是幾毫微秒的數(shù)量級(jí)，已經(jīng)吸收了偏振光的一部份熒光分子，到它們發(fā)射熒光時(shí)，已經(jīng)偏離開它們的原始取向，使得發(fā)射出熒光偏振面的方向?qū)l(fā)生變化。

    若用兩個(gè)互相垂直的偏振面測(cè)量發(fā)射的熒光強(qiáng)度之間的關(guān)系，可以估計(jì)熒光分子自由轉(zhuǎn)動(dòng)的程度。以I1和I2分別代表平行于或者垂直于激發(fā)光偏振面的熒光強(qiáng)度。

   流式細(xì)胞術(shù)測(cè)量熒光偏振常用的熒光探針為DPH（Di-phenylhexatriene）。DPH是不帶電荷的疏水性物質(zhì)，在水介質(zhì)中幾乎沒(méi)有熒光，在非極性溶劑中用紫外光激發(fā)，（zui大激發(fā)波長(zhǎng)為351nm），發(fā)藍(lán)色熒光（zui大發(fā)射波長(zhǎng)為430nm）。

   DPH的標(biāo)記程序?yàn)椋簩PH制備成溶解于THF （Tetrahydrofuran，四氫呋喃）濃度為2nM的貯液，保存于4℃暗處。用PBS稀釋貯存液成為2uM的工作液，對(duì)于含約2×10⁶細(xì)胞的1ml細(xì)胞懸液（在PBS中），加入1ml DPH工作液，在37℃下消化30分鐘，離心洗細(xì)胞后，重新懸浮在冷PBS中，置于冰上待流式測(cè)量。在熒光顯微鏡下觀察DPH結(jié)合熒光，可見到細(xì)胞內(nèi)膜和細(xì)胞外膜呈現(xiàn)明亮藍(lán)色DPH熒光，其熒光強(qiáng)度約為不染色區(qū)熒光強(qiáng)度的30倍。

    除DPH以外，還有其它一些測(cè)量膜流動(dòng)性或微粘度的熒光探針，例如DiIC18（3），它的激發(fā)zui大值為546nm，發(fā)射zui大值為565nm。還有DMA-DPH（1-（4-dimethylaminop-henyl）-6-phenylhexatriene）），它的激發(fā)zui大值為400nm，發(fā)射zui大值為500nm，DMA-DPH除光譜特性比DPH向長(zhǎng)波方向移動(dòng)外，另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是向細(xì)胞內(nèi)部標(biāo)記比DPH慢些。