氣溫驟升ELISA試劑盒做試驗(yàn)需謹(jǐn)慎

氣溫驟升ELISA試劑盒做試驗(yàn)需謹(jǐn)慎

1、ELISA試劑盒的預(yù)備
按ELISA試劑盒說明書的請(qǐng)求預(yù)備試驗(yàn)中需用的試劑。ELISA頂用的蒸餾水或去離子水，包含用于洗刷的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液運(yùn)用pH計(jì)測(cè)量較正。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后運(yùn)用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的有些應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。
2、保溫
在ELISA中通常有兩次抗原抗體反響，即加標(biāo)本和加酶物后?？乖贵w反響的完結(jié)需求有必定的溫度和時(shí)刻，這一保溫進(jìn)程稱為溫育（incubation），有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當(dāng)。
ELISA屬固相免疫測(cè)定，抗原、抗體的只在固相表面上發(fā)作。以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標(biāo)本，其間的抗原并不是都有平等的和固相抗的時(shí)機(jī)，只需zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。這是一個(gè)逐漸平衡的進(jìn)程，因而需經(jīng)擴(kuò)散才干到達(dá)反響的結(jié)尾。在這以后參加的酶符號(hào)抗體與固相抗原的也相同如此。這即是為何ELISA反響老是需求必定時(shí)刻的溫育。
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃（冰箱溫度）等。37℃是試驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體的適宜溫度。ELISA試劑盒在樹立ELISA辦法作反響動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，試驗(yàn)標(biāo)明，兩次抗原抗體反響通常在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，產(chǎn)品的生成可達(dá)。為加快反響，可進(jìn)步反響的溫度，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反響4℃更為*，在放射免疫測(cè)定中多使反響在冰箱中夜，以構(gòu)成zui多的沉積。但因所需時(shí)刻太長(zhǎng)，在ELISA中通常不予選用。
保溫的方法除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外，通常均選用水浴，可將ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底應(yīng)貼著水面，使溫度敏捷平衡。為防止蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時(shí)可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性良好的資料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度，特別是在氣溫較低的時(shí)候更應(yīng)如此。無論是水浴還是濕盒溫育，反響板均不宜疊放，以保證各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響，操作時(shí)的室溫應(yīng)嚴(yán)厲約束在規(guī)則的范圍內(nèi)，規(guī)范室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時(shí)可根據(jù)說明書的請(qǐng)求操控溫育。室溫溫育時(shí)，ELISA板只需平置于操作臺(tái)上即可。應(yīng)留意溫育的溫度和時(shí)刻應(yīng)按規(guī)則力求。為保證這一點(diǎn)，一個(gè)人操作時(shí)，一次不宜多于兩塊板同時(shí)測(cè)定。
ELISA試劑盒運(yùn)用留意事項(xiàng)
1、試劑蛻變的痕跡發(fā)色試劑有任何色彩標(biāo)明發(fā)色劑蛻變，應(yīng)當(dāng)棄之。0規(guī)范的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時(shí)，表示試劑也許蛻變。
2、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20～25℃)會(huì)導(dǎo)致一切規(guī)范的OD值偏低。
3、在洗板進(jìn)程中假如呈現(xiàn)板孔干燥的狀況，則會(huì)呈現(xiàn)規(guī)范曲線不成線性，重復(fù)性欠好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
4、每加一種試劑前需將其搖勻。
5、在參加底物液A液和底物液B液后，通常顯色時(shí)刻為15～20min即可。若色彩較淺，可延長(zhǎng)反響時(shí)刻到30min。反之，則減短反響時(shí)刻。
6、反響停止液為2M硫酸，防止觸摸肌膚。
7、不要運(yùn)用過了有用日期的ELISA試劑盒;也不要運(yùn)用過了有用期的試劑盒中的任何試劑，摻雜運(yùn)用過了有用期的ELISA檢查試劑盒會(huì)引起活絡(luò)度的下降;不要交換運(yùn)用不一樣批號(hào)試劑盒中的試劑。
當(dāng)然除了留意以上幾點(diǎn)外，選對(duì)ELISA試劑盒也很要害，可以大大下降試驗(yàn)危險(xiǎn)性。