內(nèi)分泌腺來(lái)源血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

內(nèi)分泌腺來(lái)源血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)檢測(cè)試劑盒

適用生物 Homo sapiens (Human，人)
檢測(cè)范圍 15.63-1000pg/mL 靈敏度 5.9pg/mL
樣本類型 Serum, plasma, tissue homogenates, cell lysates, cell culture supernates and other biological fluids.
實(shí)驗(yàn)時(shí)長(zhǎng) 4.5h 實(shí)驗(yàn)方法 雙抗夾心法
規(guī)格 96T

內(nèi)分泌腺來(lái)源血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
適用生物：人
使用說(shuō)明書
僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!
內(nèi)分泌腺來(lái)源血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)檢測(cè)試劑盒[預(yù)期應(yīng)用]
本試劑盒運(yùn)用雙抗體夾心ELISA 法定量測(cè)定人血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生
物液體中EG-VEGF 含量。
[試劑盒內(nèi)容]
試劑名稱數(shù)量試劑名稱數(shù)量
96孔板(預(yù)包被) 1 96孔板覆膜4
標(biāo)準(zhǔn)品2 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1×20mL
檢測(cè)溶液A 1×120μL 檢測(cè)稀釋液A 1×12mL
檢測(cè)溶液B 1×120μL 檢測(cè)稀釋液B 1×12mL
TMB底物1×9mL 終止液1×6mL
濃洗滌液(30×) 1×20mL 使用說(shuō)明書1
[需自備的設(shè)備及試劑]
1、450±10nm 濾光片的酶標(biāo)儀(建議儀器使用前提前預(yù)熱)
2、單道或多道微量加液器及吸頭
3、稀釋樣品的EP 管
4、蒸餾水或去離子水
5、吸水紙
6、盛放洗液的容器
[試劑盒的儲(chǔ)存及有效期]
1、未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標(biāo)簽上所示保存。請(qǐng)注意，收到試劑盒后請(qǐng)盡快將標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶
液A、檢測(cè)溶液B 以及96 孔板保存于-20oC。
2、使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存，開封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于
-20oC，避免潮濕。
注意：
試劑盒內(nèi)酶標(biāo)條可拆卸，按實(shí)驗(yàn)需求可分多次使用；使用后的剩余試劑盒建議在實(shí)驗(yàn)后1 個(gè)月內(nèi)使用完畢。
產(chǎn)品過(guò)期時(shí)間以盒子上的標(biāo)簽為準(zhǔn)，保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的。
[標(biāo)本的采集與保存]
1、血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2 小時(shí)或4oC ，然后1000×g 離心20 分鐘，取上清即
可，或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、血漿：用EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30 分鐘內(nèi)于2-8oC 1000×g 離心15 分鐘，
取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、組織勻漿：
1） 取適量組織塊，于預(yù)冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，稱重后備用（組織塊較大需先剪碎后
再勻漿）；
2） 可同時(shí)選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10mL 預(yù)冷PBS 進(jìn)行充
分研磨，該過(guò)程需在冰上進(jìn)行（有條件實(shí)驗(yàn)室可選用機(jī)器勻漿）；得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融
進(jìn)一步處理（超聲破碎過(guò)程中注意冰浴降溫；反復(fù)凍融法可重復(fù)2 次）。
3） 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘，留取上清即可檢測(cè)。
4、細(xì)胞裂解液：
1）貼壁細(xì)胞需要先用胰酶消化，離心收集細(xì)胞（懸浮細(xì)胞可直接離心收集）；
2）將收集到的細(xì)胞用冷PBS 洗3 次；
3）物理方法裂解細(xì)胞（可先超聲破碎細(xì)胞，再反復(fù)凍融）：
i 超聲破碎：取適量PBS 重懸細(xì)胞，用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂。
ii 反復(fù)凍融：將待破碎的細(xì)胞在-20oC 以下冰凍，室溫融解，反復(fù)3 次，使細(xì)胞溶脹破碎。
4）將標(biāo)本于2-8oC 1500×g 離心10 分鐘，收集上清備用。
5、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000×g 離心20 分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保
存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注意：
1、以上標(biāo)本均需密封保存，4oC 保存應(yīng)小于1 周，-20oC 不應(yīng)超過(guò)1 個(gè)月，-80oC 不應(yīng)超過(guò)2 個(gè)月。
2、標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
3、標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。
[試劑準(zhǔn)備]
1、使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC 溶解。
2、標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10 分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以
助溶解，其濃度為4,000pg/mL(貯液)。先將其稀釋為1,000pg/mL(標(biāo)準(zhǔn)曲線zui高濃度)后，再準(zhǔn)備7 個(gè)稀釋
標(biāo)準(zhǔn)品的EP 管，每個(gè)EP 管中加入500μL 的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成1,000pg/mL, 500pg/mL,
250pg/mL, 125pg/mL, 62.5pg/mL, 31.2pg/mL, 15.6pg/mL，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保
證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
Tube 1 2 3 4 5 6 7 8 9
pg/mL 4,000 1,000 500 250 125 62.5 31.2 15.6 0
3、檢測(cè)溶液A 及檢測(cè)溶液B：Detection A 及Detection B 在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或
瓶蓋的液體沉積到管底。臨用前分別以檢測(cè)稀釋液A 或B1:100 稀釋(如：10μL 檢測(cè)溶液A/990μL 檢測(cè)稀釋
液A)，充分混勻，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(100μL/孔)，實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制
0.1-0.2mL。
4、濃洗滌液：用580mL 蒸餾水或去離子水將20mL 濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30 倍稀釋。
5、底物溶液：請(qǐng)用滅菌的移液器吸頭吸取所需體積的TMB 至另一干凈容器中使用，容器中剩余的底物應(yīng)予丟棄，
不要倒回TMB 瓶中。
注意：
1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋不能直接在板中進(jìn)行。
2、標(biāo)準(zhǔn)品請(qǐng)于臨用前15 分鐘內(nèi)配制。該標(biāo)準(zhǔn)品只能使用一次。
3、標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A 工作液、檢測(cè)溶液B 工作液請(qǐng)使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆?；靹驎r(shí)要輕輕充分混
勻，避免起泡。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確請(qǐng)使用微量吸管，并校準(zhǔn)微量加液器。請(qǐng)依據(jù)所需的量配制，盡
量不要微量配制(如吸取檢測(cè)溶液A 時(shí)，一次不要小于10μL)，以避免造成濃度誤差。
4、請(qǐng)勿重復(fù)使用已經(jīng)稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A 工作液和檢測(cè)溶液B 工作液。
5、濃洗滌液中如有結(jié)晶析出，請(qǐng)先溫育至室溫，輕輕混勻，至到結(jié)晶*溶解再進(jìn)行配制。
6、試劑盒中部分試劑為儲(chǔ)存液，客戶需配置成工作液后使用，在配置過(guò)程中如因純凈水質(zhì)量差或水質(zhì)污染，以
及實(shí)驗(yàn)中所用耗材潔凈度差，可能造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，甚至*錯(cuò)誤，請(qǐng)使用雙蒸水。
[標(biāo)本處理]
1、本公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé)，不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本
的可能使用量，預(yù)留充足的樣本。
2、實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)標(biāo)本含量，如果標(biāo)本濃度過(guò)高，應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋，使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測(cè)范圍，
計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mol/L 的PBS 稀釋(PH=7.0-7.2)。
3、若所檢樣本不包含在說(shuō)明書所列樣本之中，建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性，并注意留存樣本。
4、使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA 實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。
5、若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等，所以可能存
在檢測(cè)不出的情況。
6、某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè)抗體及捕獲抗體不匹
配，而不被檢測(cè)出。
7、建議使用新鮮樣本，保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。
[操作步驟]
1、加樣：分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔、空白孔。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔7 孔，依次加入100μL 不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品(見試劑準(zhǔn)
備2)。空白孔加100μL(見試劑準(zhǔn)備第二步zui后一管)，余孔加待測(cè)樣品100μL，酶標(biāo)板加上覆膜，37oC 溫
育2 小時(shí)。
2、棄去液體，甩干，不用洗滌。
3、每孔加檢測(cè)溶液A 工作液100μL(臨用前配制)，酶標(biāo)板加上覆膜，37oC 溫育1 小時(shí)。
4、棄去孔內(nèi)液體，每孔用350μL 的洗滌液洗滌，浸泡1-2 分鐘，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，
在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)，重復(fù)洗板3 次。zui后一次
洗滌后，要把孔內(nèi)的洗滌液*甩干。自動(dòng)洗板機(jī)亦可。
5、每孔加檢測(cè)溶液B 工作液(臨用前配制)100μL，加上覆膜，37oC 溫育30 分鐘。
6、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5 次，方法同步驟4。
7、每孔加底物溶液90μL，酶標(biāo)板加上覆膜，37oC 避光顯色(反應(yīng)時(shí)間控制在15-25 分鐘，不要超過(guò)30 分鐘。
當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4 孔梯度不明顯時(shí)，即可終止)。
8、每孔加終止溶液50μL，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物溶液的加入順序相
同。如出現(xiàn)顏色不勻一，請(qǐng)輕輕晃動(dòng)酶標(biāo)板以使溶液混合均勻。
9、在確保酶標(biāo)板底無(wú)水滴及孔內(nèi)無(wú)氣泡后，立即用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(O.D.值)。
注意：
1、試劑準(zhǔn)備：準(zhǔn)備一次實(shí)驗(yàn)所需要的酶標(biāo)條，其它的可從微孔板上拆下，密封，按照說(shuō)明書要求保存，以備下
次使用。
2、加樣：實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。加樣時(shí)注意不要有氣泡，將樣品加于酶標(biāo)板底部，
盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。加樣或加試劑時(shí)，*個(gè)孔與zui后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，
將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)溫育"時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。因此，一次加樣時(shí)間(包括
標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)控制在10 分鐘內(nèi)。推薦設(shè)置復(fù)孔進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
3、溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實(shí)驗(yàn)時(shí)請(qǐng)將加上蓋或覆膜的酶標(biāo)板置于濕盒內(nèi)，以避免液體蒸發(fā)，洗板后應(yīng)盡快進(jìn)
行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài)，同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的溫育時(shí)間和溫度。
4、洗滌：充分的洗滌非常重要，在每次洗滌過(guò)程中，都要將洗滌液*甩干。洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌
液應(yīng)在濾紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響zui后
的酶標(biāo)儀讀數(shù)。如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。
5、反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10 分鐘觀察一次)，如顏色較深，
請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過(guò)強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
6、底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
7、如果實(shí)驗(yàn)室內(nèi)濕度低于60%，推薦使用加濕器提高濕度水平。
[實(shí)驗(yàn)原理]
將EG-VEGF 抗體包被于96 孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中的EG-VEGF 與連
接于固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入生物素化的EG-VEGF 抗體，將未結(jié)合的生物素化抗體洗凈后，加入HRP 標(biāo)
記的親和素，再次*洗滌后加入TMB 底物顯色。TMB 在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化
成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的EG-VEGF 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(O.D.值)，計(jì)算
樣品濃度。
[計(jì)算]
各標(biāo)準(zhǔn)品及樣本O.D.值扣除空白孔O.D.值后作圖(七點(diǎn)圖)，如設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計(jì)算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度
為縱坐標(biāo)(或?qū)?shù)坐標(biāo))，O.D.值為橫坐標(biāo)(或?qū)?shù)坐標(biāo)），繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(*方程式應(yīng)依回歸方程計(jì)算的R2值來(lái)定，
以R2 值越趨近于1 為好)。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析，如curve expert 1.30，根據(jù)樣品O.D.值，由標(biāo)
準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與O.D.值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式，將樣品的
O.D.值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
[典型數(shù)據(jù)]
為了便于計(jì)算，盡管濃度為自變量而O.D.值為因變量，我們繪圖時(shí)仍采用標(biāo)準(zhǔn)品的O.D.值作為橫坐標(biāo)(X 軸)，標(biāo)準(zhǔn)
品的濃度為縱坐標(biāo)(Y 軸)。同時(shí)為了試驗(yàn)結(jié)果的直觀性，圖中提供的是原始數(shù)據(jù)而非對(duì)數(shù)值。推薦使用對(duì)數(shù)
值建立標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。由于實(shí)驗(yàn)操作條件的不同（如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和溫度條件等），標(biāo)準(zhǔn)曲線的
O.D.值會(huì)有所差異。所提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線僅供參考，實(shí)驗(yàn)者需要根據(jù)自已的實(shí)驗(yàn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
人內(nèi)分泌腺來(lái)源血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)檢測(cè)試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線
[檢測(cè)范圍]
15.6pg/mL-1,000pg/mL
[zui低檢測(cè)限]
5.9pg/mL
此值為20 個(gè)空白樣品(即標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液)測(cè)定的平均值加二倍標(biāo)準(zhǔn)差所對(duì)應(yīng)的濃度。
[特異性]
本試劑盒用于檢測(cè)EG-VEGF，經(jīng)檢測(cè)與其它相似物質(zhì)無(wú)明顯交叉反應(yīng)。
由于受到技術(shù)及樣本來(lái)源的限制，不可能完成對(duì)所有相關(guān)或相似物質(zhì)交叉反應(yīng)檢測(cè)，因此本試劑盒有可能與未經(jīng)
檢測(cè)的其它物質(zhì)有交叉反應(yīng)。
[回收率]
分別于定值血清及血漿樣本中加入一定量的EG-VEGF（加標(biāo)樣品），重復(fù)測(cè)定并計(jì)算其均值，回收率為測(cè)定值與理
論值的比率。
樣本回收率范圍(%) 平均回收率(%)
血清(n=5) 91-104 97
EDTA 血漿(n=5) 88-99 94
肝素血漿(n=5) 78-93 85
[線性]
在定值血清及血漿樣本內(nèi)加入適量的EG-VEGF，并倍比稀釋成1:2，1:4，1:8，1:16 的待測(cè)樣本，線性范圍即為
稀釋后樣本中EG-VEGF 含量的測(cè)定值與理論值的比率。
樣本1：2 1：4 1：8 1：16
血清(n=5) 85-93% 86-98% 78-92% 90-99%
EDTA 血漿(n=5) 95-103% 98-105% 83-96% 81-94%
肝素血漿(n=5) 80-90% 91-102% 79-97% 87-101%
[精密度]
精密度用樣品測(cè)定值的變異系數(shù)CV 表示。CV(%) = SD/mean×100
批內(nèi)差：取同批次試劑盒對(duì)低、中、高值定值樣本進(jìn)行定量檢測(cè),每份樣本連續(xù)測(cè)定20 次，分別計(jì)算不同濃度樣
本的平均值及SD 值。
批間差：選取3 個(gè)不同批次的試劑盒分別對(duì)低、中、高值定值樣本進(jìn)行定量測(cè)定，每個(gè)樣本使用同一試劑盒重復(fù)
測(cè)定8 次，分別計(jì)算不同濃度樣本的平均值及SD 值。
批內(nèi)差： CV<10%
批間差： CV<12%
[穩(wěn)定性]
經(jīng)測(cè)定，試劑盒在有效期內(nèi)按推薦溫度保存，其活性降低率小于5%。
為減小外部因素對(duì)試劑盒破壞前后檢測(cè)值的影響，實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境條件需盡量保持一致，尤其是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度、濕
度及溫育條件。其次由同一實(shí)驗(yàn)員來(lái)進(jìn)行操作可減少人為誤差。
[實(shí)驗(yàn)流程]
1、實(shí)驗(yàn)前標(biāo)準(zhǔn)品、試劑及樣本的準(zhǔn)備；
2、加樣（標(biāo)準(zhǔn)品及樣本）100μL，37oC孵育2小時(shí)；
3、吸棄，加檢測(cè)溶液A100μL，37oC孵育1小時(shí)；
4、洗板3次；
5、加檢測(cè)溶液B100μL，37oC孵育30分鐘；
6、洗板5次；
7、加TMB底物90μL，37oC孵育15－25分鐘；
8、加終止液50μL，立即450nm讀數(shù)。
[說(shuō)明]
1、由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對(duì)所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在
一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。
2、zui終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)，請(qǐng)務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本
備份。
3、不同批次的同一產(chǎn)品可能會(huì)有少許差別，如：檢測(cè)限、靈敏度以及顯色時(shí)間等，請(qǐng)依據(jù)試劑盒內(nèi)說(shuō)明書進(jìn)行
實(shí)驗(yàn)操作，電子版說(shuō)明書僅作參考。
4、只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測(cè)效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的
實(shí)驗(yàn)說(shuō)明才會(huì)得到*的檢測(cè)結(jié)果。
5、在儲(chǔ)存及溫育過(guò)程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染，因?yàn)榈鞍?BR>水解酶的干擾將導(dǎo)致出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。
6、剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。請(qǐng)勿提前將酶
標(biāo)板從包裝袋里拿出。
7、由于操作者不熟練、操作失誤或讀數(shù)儀程序選用錯(cuò)誤等有可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果的產(chǎn)生。請(qǐng)使用者使用該產(chǎn)品
前仔細(xì)閱讀說(shuō)明書，調(diào)試好酶標(biāo)儀，請(qǐng)使用配備有450±10nm 濾光片的酶標(biāo)儀，且該酶標(biāo)儀測(cè)量范圍在
0.001-3.000 O.D.或以上。
8、同一使用者在使用同一產(chǎn)品時(shí)，如不同時(shí)間訂購(gòu)，也可能會(huì)因不同批次的少量差異產(chǎn)生不同結(jié)果，因此建議
使用者在每次使用前均進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。
9、試劑盒在出廠前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格檢測(cè)，但由于運(yùn)輸條件及各實(shí)驗(yàn)室條件差異，可能會(huì)造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果與出廠結(jié)果不
一致或不同批次試劑盒批間差大的情況，對(duì)于這種情況會(huì)酌情處理。
10、本試劑盒未與其他廠家同類試劑盒或不同方法檢測(cè)同一目的蛋白的產(chǎn)品做對(duì)比，平行檢測(cè)可能會(huì)存在檢測(cè)結(jié)
果不一致的情況。
11、本操作說(shuō)明同樣適用于48T 試劑盒，但48T 試劑盒所有試劑減半。
[警告]
本試劑盒中使用了稀硫酸作為終止液，其具有輕微腐蝕性，使用時(shí)應(yīng)避免接觸衣物或眼、手等皮膚暴露部位。
[問題解答]
問題可能原因解決方案
標(biāo)準(zhǔn)曲線差
標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備不正確進(jìn)行正確的標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋
吸取及洗滌不充分充分的吸取及洗滌
移液不檢查和校正移液器
精密度低
洗滌不充分按說(shuō)明書要求充分洗滌和浸泡
混勻不充分和吸取試劑不足充分混勻和吸取試劑
重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的容器和覆膜
加樣不檢查和校正移液器
O.D 值低
每孔加的試劑量不校正移液器，加入試劑
溫育時(shí)間不正確保證充足的溫育時(shí)間
溫育溫度不正確試劑要平衡至室溫并保證準(zhǔn)確的溫育溫度
酶標(biāo)記物或底物失效通過(guò)混合酶標(biāo)記物和底物，顏色應(yīng)迅速顯現(xiàn)來(lái)檢查
沒有加入終止液按照說(shuō)明書實(shí)驗(yàn)操作步驟加入終止液
超出讀數(shù)時(shí)間讀數(shù)在說(shuō)明書推薦的讀數(shù)時(shí)間內(nèi)讀數(shù)
樣本值
不正確的樣本儲(chǔ)存方式正確儲(chǔ)存樣本，使用新鮮樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)
不正確的樣本收集和處理方法采取正確的樣本收集和處理方法
待測(cè)物質(zhì)在樣本中含量低使用新鮮樣本，重復(fù)實(shí)驗(yàn)