小鼠腎足細胞系（株）傳代基本技術(shù)

Mouse podocyte 小鼠腎足細胞系（株）傳代基本技術(shù)
1.選用細胞生長狀態(tài)好(80-90%)的細胞進行傳代。
2.吸除細胞培養(yǎng)液。用含雙抗的1×PBS（pH7.4)清洗細胞培養(yǎng)
瓶2次。加入1ml 消化液至細胞培養(yǎng)瓶，輕輕搖動，使細胞消化
液剛剛覆蓋細胞表面。注：消化液配比為：0.25%胰蛋白酶＋
0.02%EDTA。
3.將細胞培養(yǎng)瓶置于5%CO2、95%空氣、37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)數(shù)
分鐘后，在顯微鏡下觀察細胞的消化狀態(tài)。注意：若貼壁細胞逐
漸趨于圓形或部分懸浮后，即可用手指輕輕拍打細胞培養(yǎng)瓶側(cè)部
或底部使大部分貼壁細胞脫落，之后立即加入細胞終止液，終止
細胞消化。每種細胞的消化時間有差異，消化時注意觀察，不要
消化太久。
4.吹打培養(yǎng)瓶中懸浮細胞若干次，吸出細胞懸浮液，轉(zhuǎn)入15ml
離心管中，800rpm 離心5分鐘。
5.棄離心管中上清液，加入細胞培養(yǎng)液重懸細胞。細胞計數(shù)，確
定細胞數(shù)量。
6.細胞分瓶后，加入適量細胞培養(yǎng)液至細胞培養(yǎng)瓶中，置于
5%CO2、95%空氣、37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)24小時。