常見(jiàn)染色液的配制

常見(jiàn)染色液的配制

實(shí)驗(yàn)步驟

　　
一、呂氏(Loeffler)堿性美藍(lán)染液 

　　A液：美藍(lán)(methylene blue) 0．6g

　　95%酒精 30ml

　　B液：KOH 0．01g

　　蒸餾水 100ml

　　分別配制A液和B液，配好后混合即可。

　　
二、齊氏(Ziehl)石炭酸復(fù)紅染色液

　　A液：堿性復(fù)紅(basic fuchsin) 0．3g

　　95%酒精 10ml

　　B液：石炭酸 5．0g

　　蒸餾水 95ml

　　將堿性復(fù)紅在研缽中研磨后，逐漸加入95%酒精，繼續(xù)研磨使其溶解，配成A液。

　　將石炭酸溶解于水中，配成B液。

　　混合A液及B液即成。通?？蓪⒋嘶旌弦合♂?—10倍使用，稀釋液易變質(zhì)失效，一次不宜多配。

　　
三、革蘭氏(Gram)染色液

　　1．草酸銨結(jié)晶紫染液

　　A液：結(jié)晶紫(crystal violet) 2g

　　95%酒精 20ml

　　B液：草酸銨(ammonium oxalate) 0．8g

　　蒸餾水 80ml

　　混合A、B二液，靜置48小時(shí)后使用。

　　2．盧戈氏(Lugol)碘液

　　碘片 1．0g

　　碘化鉀 2．0g

　　蒸餾水 300ml

　　先將碘化鉀溶解在少量水中，再將碘片溶解在碘化鉀溶液中，待碘全溶后，加足水分即成。

　　3．95%的酒精溶液。

　　4．番紅復(fù)染液

　　番紅(safranine O) 2．5g

　　95%酒精 100ml

　　取上述配好的番紅酒精溶液10ml與80ml蒸餾水混勻即成。

　　
四、芽孢染色液 

　　1．孔雀綠染液

　　孔雀綠(malachite green) 5g

　　蒸餾水 100ml

　　2．番紅水溶液

　　番紅 0．5g

　　蒸餾水 100ml

　　3．苯酚品紅溶液

　　堿性品紅 11g

　　* 100ml

　　制法取上述溶液10ml與100ml5%的苯酚溶液混合，過(guò)濾備用。

　　4．黑色素(nigrosin)溶液

　　水溶性黑色素 10g

　　蒸餾水 100ml

　　稱取10g黑色素溶于100ml蒸餾水中，置沸水浴中30分鐘后，濾紙過(guò)濾

　　二次，補(bǔ)加水到100ml，加0．5ml甲醛，備用。

　　
五、莢膜染色液 

　　1．黑色素水溶液

　　黑色素 5g

　　蒸餾水 100ml

　　福爾馬林(40%甲醛) 0．5ml

　　將黑色素在蒸餾水中煮沸5分鐘，然后加入福爾馬林作防腐劑。

　　2．番紅染液

　　與革蘭氏染液中番紅復(fù)染液相同。

　　
六、鞭毛染色液 

　　A液：?jiǎn)螌幩?5g

　　FeCl3 1．5g

　　蒸餾水 100ml

　　福爾馬林(15%) 2．0ml

　　NaOH(1%) 1．0ml

　　配好后，當(dāng)日使用，次日效果差，第三日則不宜使用。

　　B液：AgNO3 2g

　　蒸餾水 100ml

　　待AgNO3溶解后，取出10ml備用，向其余的90mlAgNO3中滴入濃NH4ON，使之成為很濃厚的懸浮液，再繼續(xù)滴加NH4OH，直到新形成的沉淀又重新剛剛?cè)芙鉃橹?。再將備用?0mlAgNO3慢慢滴入，則出現(xiàn)薄霧，但輕輕搖動(dòng)后，薄霧狀沉淀又消失，再滴入AgNO3，直到搖動(dòng)后仍呈現(xiàn)輕微而穩(wěn)定的薄霧狀沉淀為止。如所呈霧不重，此染劑可使用一周，如霧重，則銀鹽沉淀出，不宜使用。

　
　
七、富爾根氏核染色液

　　1．席夫氏(Schiff)試劑

　　將1g堿性復(fù)紅加入200ml煮沸的蒸餾水中，振蕩5分鐘，冷至50℃左右過(guò)濾，再加入1mol/LHC120ml，搖勻。待冷至25℃時(shí)，加Na2S2O5(偏重亞硫酸鈉)3g，搖勻后裝在棕色瓶中，用黑紙包好，放置暗處過(guò)夜，此時(shí)試劑應(yīng)為淡黃色(如為粉紅色則不能用)，再加中性活性炭過(guò)濾，濾液振蕩1分鐘后，再過(guò)濾，將此濾液置冷暗處備用(注意：過(guò)濾需在避光條件下進(jìn)行)。

　　在整個(gè)操作過(guò)程中所用的一切器皿都需十分潔凈、干燥，以消除還原性物質(zhì)。

　　2．Schandium固定液

　　A液：飽和升水溶液

　　50ml升水溶液加95%酒精25ml混合即得。

　　B液：冰醋酸

　　取A液9毫升 B液1毫升，混勻后加熱至60℃。

　　3．亞硫酸水溶液

　　10%偏重亞硫酸鈉水溶液5ml，1mol/LHCl5ml，加蒸餾水100ml混合即得。

　　
八、Bouin氏固定液 

　　苦味酸飽和水溶液 75ml

　　福爾馬林(40%甲醛) 25ml

　　冰醋酸 5ml

　　1g苦味酸可制成75ml飽和水溶液。

　　先將苦味酸溶解成水溶液，然后再加入福爾馬林和冰醋酸搖勻即成。

　　
九、乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液

　　石炭酸 10g

　　乳酸(比重1．21) 10ml

　　甘油 20ml

　　蒸餾水 10ml

　　棉藍(lán)(cottonblue) 0．02g

　　將石炭酸加在蒸餾水中加熱溶解，然后加入乳酸和甘油，zui后加入棉藍(lán)，使其溶解即成。

　　
十、瑞氏(Wright)染色液 

　　瑞氏染料粉末 0．3g

　　甘油 3ml

　　甲醇 97ml

　　將染料粉末置于干燥的乳缽內(nèi)研磨，先加甘油，后加甲醇，放玻璃瓶中過(guò)夜，過(guò)濾即可。

　　十一、美藍(lán)(Levowitz-Weber)染液 (實(shí)驗(yàn)62)

　　在52ml95%酒精和44ml四氯乙烷的三角燒瓶中，慢慢加入0．6g氯化美藍(lán)(met hylene blue chloride)，旋搖三角燒瓶，使其溶解。放5—10℃下，12—24小時(shí)，然后加入4ml冰醋酸。用質(zhì)量好的濾紙如WhatmanNo．42或與之同質(zhì)量的濾紙過(guò)濾。貯存于清潔的密閉容器內(nèi)。