培養(yǎng)基的配制

培養(yǎng)基的配制

一、配制用水 
　　培養(yǎng)基的大部分是水，所以水的質量直接影響培養(yǎng)基的質量。按Waymouth標準，水的電阻應為200萬歐姆，一般實驗室里以玻璃蒸餾器制備的 
　　雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。 
　　二、培養(yǎng)基 
　　培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調pH至7.2～7.4，若pH值超 
　　過7.6或遠低于6.8，則大多數(shù)細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。 
　　三、血清 
　　培養(yǎng)中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌，無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體，置4℃冰箱存放待用。配制時含 
　　量視培養(yǎng)細胞種類、時間而定，一般用10—15%。由于血清成分復雜、條件不易控制，可選用無血清培養(yǎng)基。 
　　四、抗菌素 
　　為防止培養(yǎng)時期細菌的污染，可在培養(yǎng)基中添加適當抗菌素，一般用量與組織細胞培養(yǎng)相同：卡那霉素100單位/毫升，或雙抗--青霉素100單位/ 
　　毫升，鏈霉素100微克/毫升。 
　　五、植物血凝素（PHA） 
　　非增殖期的細胞不能制備染色體，如人外周血淋巴細胞，但在離體培養(yǎng)過程中，在PHA的作用下，可被刺激轉化為淋巴母細胞而進入有絲分裂。 
　　經(jīng)實驗測定其分裂高峰分別于培養(yǎng)后44—48小時和68—72小時。 
　　PHA有粘多糖，蛋白質兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂，蛋白質起凝集作用。PHA激活的細胞數(shù)隨其濃度而增加，直至全部免疫活性細胞均 
　　被激活為止，但PHA濃度過高會引起凝集，一般采用4%濃度為好。