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HT115(DE3) Chemically Competent Cell

產(chǎn)品規(guī)格

HT115(DE3)：                                                    100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                           10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                                   -80℃（6個(gè)月） 

基因型

F- mcrA mcrB, IN(rrnD-rrnE)1 rnc14::Tn10(DE3 lavUV5::T7 polymerase)

HT115(DE3) Chemically Competent Cell產(chǎn)品說(shuō)明

HT115(DE3)菌株是一類(lèi)特殊的RNase III缺陷型大腸桿菌菌株，可以飼喂線(xiàn)蟲(chóng)，主要用于秀麗隱桿線(xiàn)蟲(chóng)（C. elegans）的RNAi干擾試驗(yàn)。該菌株可以在LB或2YT培養(yǎng)基中正常生長(zhǎng)，Tn10轉(zhuǎn)座子的存在使其具有四環(huán)素抗性。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū) (DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶，在IPTG存在時(shí)可誘導(dǎo)T7 RNA聚合酶大量表達(dá)，進(jìn)而啟動(dòng)線(xiàn)蟲(chóng)ds RNA的表達(dá))，可同時(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，除了用于線(xiàn)蟲(chóng)RNAi干擾試驗(yàn)，也可用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。HT115(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá)0.5×10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. HT115(DE3)感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質(zhì)粒并用手打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的LB無(wú)菌培養(yǎng)液，37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。