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BL21(AI) Chemically Competent Cell

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具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海

更新時間:2020-09-02 15:57:40瀏覽次數(shù):790次

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純度 99.99% 供貨周期 現(xiàn)貨
規(guī)格 100μl/支 貨號 XY9052
應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) 主要用途 BL21(AI)是大腸桿菌B/r型菌株(E.coli B/r)。BL21(AI)
BL21(AI) Chemically Competent Cell是大腸桿菌B/r型菌株(E.coli B/r)。BL21(AI) 來源于BL21菌株,為Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株,這兩種酶的缺失有效防止異源蛋白在大腸桿菌體內(nèi)的降解。在培養(yǎng)基中添加L-阿拉伯糖可誘導(dǎo)araBAD啟動子下游T7RNA聚合酶的表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)目的蛋白的表達(dá)。

BL21(AI) Chemically Competent Cell

 

產(chǎn)品規(guī)格 )

 

BL21(AI):                                                   100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期):                             -80℃(6個月) 

基因型

F- omphsdSB(rB-mB-gal dcm araB::T7RNAP-tetA

 

BL21(AI) Chemically Competent Cell產(chǎn)品說明

BL21(AI)是大腸桿菌B/r型菌株(E.coli B/r)。BL21(AI) 來源于BL21菌株,為Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株,這兩種酶的缺失有效防止異源蛋白在大腸桿菌體內(nèi)的降解。在培養(yǎng)基中添加L-阿拉伯糖可誘導(dǎo)araBAD啟動子下游T7RNA聚合酶的表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)目的蛋白的表達(dá)。在培養(yǎng)基中添加葡萄糖可抑制araBAD啟動子下游T7RNA聚合酶的表達(dá)進(jìn)而抑制目的蛋白的表達(dá)。BL21(AI) 感受態(tài)細(xì)胞適用于任何以T7啟動子為基礎(chǔ)的表達(dá)載體,能夠進(jìn)行高水平的重組蛋白表達(dá)。因為菌株能夠?qū)w內(nèi)的T7 RNA聚合酶水平進(jìn)行高效調(diào)節(jié),BL21(AI) 感受態(tài)細(xì)胞能夠表達(dá)對其他BL21細(xì)胞有毒性或抑制生長的蛋白。普通重組蛋白在BL21(AI) 菌株中獲得產(chǎn)量和其他BL21菌株產(chǎn)量相當(dāng);對大部分毒性蛋白,在BL21(AI) 菌株中獲得的產(chǎn)量高于BL21(DE3)pLysS菌株或BL21(DE3)菌株。BL21(AI) 感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率高達(dá)108cfu/μg DNA。

 

 

操作方法

 

1.  BL21(AI)感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YT或LB),混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含抗生素的2YT 或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

 

 

注意:

1. Brian Caliendo (Voigt 實驗室)報道過pCP20質(zhì)粒比較難于轉(zhuǎn)化到這個感受態(tài)細(xì)胞中,而pCP20轉(zhuǎn)化到其他菌株中都很正常,但是菌體原因未知。

2. 不加葡萄糖,BL21(AI) 細(xì)胞的araBAD啟動子下游的本底蛋白表達(dá)水平仍然很低,加入葡萄糖后能夠進(jìn)一步的降低本底蛋白的表達(dá)水平。

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