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BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Chemically Competent Cell

產(chǎn)品規(guī)格 

BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL：                  100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                             -80℃（6個月） 

 基因型

F^–ompT hsdS(r_B^–m_B^–) dcm⁺ Tet^R gal λ(DE3) endA Hte [argU proL Cam^R] [argU ileY leuW Strep/Spec^R] 

BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Chemically Competent Cell產(chǎn)品說明

BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株來源于Stratagene公司的BL21-Gold菌株，缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，從而減少對重組蛋白的降解，補充大腸桿菌缺乏的4種稀有密碼子 (AGA, AUA, CCC, CUA)對應(yīng)的tRNA (argU, ileY, proL, leuW)，提高外源基因，尤其是富含AT-或 GC-的真核基因在原核系統(tǒng)中的表達水平。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū) (DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶)，可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列、pGEX、pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達，同時具有四環(huán)素，氯霉素，鏈霉素，壯觀霉素抗性。BL21- CodonPlus(DE3)-RIPL 感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率高達10⁸ cfu/µg DNA。

操作方法

1. BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT 或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項

1. 感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

4. 誘導(dǎo)時，IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

5. 為獲得需要量的蛋白，誘導(dǎo)時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。