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F-DH5α快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格

F-DH5α：                                                   100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                            -80℃（6個(gè)月）

基因型

F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(r_k^-,m_k⁺) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA 

F-DH5α快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞產(chǎn)品說明

DH5α菌株是實(shí)驗(yàn)室常用的感受態(tài)細(xì)胞。 缺失核酸內(nèi)切酶 (endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA 的穩(wěn)定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍(lán)、白斑篩選。

F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，無需42℃熱激，37℃孵育步驟，只需冰浴，10min內(nèi)完成轉(zhuǎn)化、涂板操作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1~5×10 ⁸cfu/μg DNA。

 快速轉(zhuǎn)化操作方法 (10min)

1. 提前15分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預(yù)熱。

2. F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手打EP管底輕輕混勻,，冰中靜置5分鐘。

3. 用200 μl槍將感受態(tài)細(xì)胞-DNA混合物轉(zhuǎn)移到已經(jīng)37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上，涂均勻，表面無水漬。

4. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15h。

 快速熱激轉(zhuǎn)化操作方法 (25min,可提高轉(zhuǎn)化效率)

1. F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物)并用手打EP管底輕輕混勻,，冰中靜置5分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘 (晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率)。加入700 μl 不含抗生素的LB，37℃，200 rpm 復(fù)蘇10分鐘，涂板 (均勻，表面無水漬)。

3. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15h。

注意事項(xiàng)

1. F-DH5α快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞也可進(jìn)行熱激操作，對于>7 kb質(zhì)粒的構(gòu)建，為了提高轉(zhuǎn)化效率可按以下步驟操作：F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，插入冰中，5分鐘后，加入目的DNA并用手打EP管底輕輕混勻，冰中靜置20分鐘。42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中靜置2分鐘。加入700 μl LB，37℃，200 rpm復(fù)蘇30分鐘，涂板。

2. 感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長，長時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率，混入目的DNA時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. F-DH5α快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞涂氨芐/羧芐青霉素抗性平板時(shí)效率較高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，轉(zhuǎn)化效率下降(因無孵育步驟，卡那霉素等對菌體毒性較大)。若要提高卡那霉素或其他抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化效率，可按熱激轉(zhuǎn)化操作，增加孵育步驟。