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Mach1-T1 Chemically Competent Cell

產(chǎn)品規(guī)格

Mach1-T1:                                                       100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                         10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                                 -80℃（6個(gè)月）

基因型

F^- φ80(lacZ)ΔM15 ΔlacX74 hsdR(r_K^- m_K⁺) ΔrecA1398 endA1 tonA

Mach1-T1 Chemically Competent Cell產(chǎn)品說(shuō)明

Mach1-T1菌株由野生型non-K-12 E. Coli W菌株改造而來(lái)，是目前生長(zhǎng)速度較快的感受態(tài)細(xì)胞之一，在平板上 8h可見(jiàn)克隆，缺失核酸內(nèi)切酶(endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型(recA1398)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性；lacZΔM15的存在使Mach1-T1可用于藍(lán)、白斑篩選；tonA突變賦予Mach1-T1菌株對(duì)噬菌體T1和T5的抗性。Mach1-T1感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>10⁹cfu/μg DNA。

操作方法

1. Mach1-T1感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物) 并用手打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少13小時(shí)。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。