Mach1-T1 Chemically Competent Cell 返回列表頁

Mach1-T1 Chemically Competent Cell

產(chǎn)品規(guī)格

Mach1-T1:                                                       100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                         10μl

保存條件(保質期)：                                 -80℃（6個月）

基因型

F^- φ80(lacZ)ΔM15 ΔlacX74 hsdR(r_K^- m_K⁺) ΔrecA1398 endA1 tonA

Mach1-T1 Chemically Competent Cell產(chǎn)品說明

Mach1-T1菌株由野生型non-K-12 E. Coli W菌株改造而來，是目前生長速度較快的感受態(tài)細胞之一，在平板上 8h可見克隆，缺失核酸內切酶(endA)，提高了質粒DNA的產(chǎn)量和質量；重組酶缺陷型(recA1398)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性；lacZΔM15的存在使Mach1-T1可用于藍、白斑篩選；tonA突變賦予Mach1-T1菌株對噬菌體T1和T5的抗性。Mach1-T1感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>10⁹cfu/μg DNA。

操作方法

1. Mach1-T1感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質?；蜻B接產(chǎn)物) 并用手打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少13小時。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質粒或連接產(chǎn)物時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應減少終用于涂板的菌量。